豬圓環(huán)病毒相關疾病（porcine circovirus-associated disease,PCVAD）的免疫預防具有重要的經濟價值。我國國產PCV2疫苗均系PK15細胞增殖PCV2病毒、配用油佐劑制備而成,臨床免疫副反應大。一般認為,免疫副反應多是因抗原不純引起的,另外,游離狀態(tài)的PCV2病毒DNA可能引發(fā)免疫抑制。因此,研究PCV2抗原的濃縮純化技術,提升國產疫苗質量,具有重要意義與實際應用價值。GEM表面展示系統(tǒng)是國外近年發(fā)展起來的一種抗原制備新技術。該技術包括GEM 顆粒（Gram-positive bacterial enhancer matrix particles）和蛋白錨鉤（Protein anchor,PA）兩個構件。GEM顆粒是乳酸乳球菌MG1363經熱酸煮沸處理,去除其全部蛋白和核酸等物質后獲得的球形細胞壁肽聚糖骨架。蛋白錨鉤PA是N-乙酰氨基葡萄糖苷酶的一個結構域,可以非共價方式與GEM顆粒結合。大量研究表明,與PA融合表達的目標蛋白可以展示在GEM顆粒表面。因此,設計并表達PA與病毒特異性納米抗體的融合蛋白,GEM技術便可拓展應用于病毒抗原的濃縮純化。本研... 

【文章來源】：南京農業(yè)大學江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數】：99 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
英文縮略詞表
上篇 文獻綜述
    第一章 GEM表面展示系統(tǒng)的研究進展
        1 乳酸乳球菌表面展示系統(tǒng)
        2 GEM表面展示系統(tǒng)
            2.1 GEM顆粒
            2.2 PA蛋白
        3 GEM表面展示系統(tǒng)在疫苗研發(fā)中的應用
        4 展望
        參考文獻
    第二章 納米抗體的研究進展
        1 納米抗體的結構
        2 納米抗體的特性
            2.1 溶解性好、穩(wěn)定性高
            2.2 可識別獨特的構造表位
            2.3 表達量高
            2.4 其他特性
        3 納米抗體的應用
            3.1 構建納米抗體庫與特異性納米抗體的篩選
            3.2 動物疾病的應用
        參考文獻
    第三章 豬圓環(huán)病毒2型疫苗研究進展
        1 PCV2病原學及分子生物學研究
        2 PCV2疫苗研究
            2.1 滅活疫苗
            2.2 減毒活疫苗
            2.3 重組亞單位疫苗
            2.4 載體疫苗
            2.5 核酸疫苗
        3 PCV2疫苗存在的問題
        4 展望
        參考文獻
下篇 試驗研究
    第四章 GEM-PCV2純化系統(tǒng)基礎構件的制備
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結果
            2.1 GEM顆粒電鏡觀察鑒定
            2.2 重組質粒pZQ-PA-Nb的鑒定
            2.3 接頭融合蛋白的SDS-PAGE鑒定與可溶性鑒定
            2.4 包涵體復性與活性SDS-PAGE鑒定
            2.5 GEM-Pb電鏡觀察鑒定
        3 討論
        參考文獻
    第五章 PCV2病毒-GEM純化方法的建立
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結果
            2.1 GEM-Pb與PCV2病毒的結合后SDS-PAGE分析
            2.2 GEM-Pb與PCV2病毒結合的鑒定
        3 討論
        參考文獻
    第六章 GEM-PCV2疫苗免疫保護效力研究
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結果
            2.1 PCV2特異性抗體水平檢測結果
            2.2 攻毒保護試驗結果
        3 討論
        參考文獻
    第七章 PCV2-VLP-GEM純化方法的建立
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結果
            2.1 重組Cap蛋白的SDS-PAGE鑒定與可溶性鑒定
            2.2 重組Cap蛋白體外形成VLP的電鏡觀察
            2.3 GEM-Pb與PCV2-VLP結合的鑒定
        3 討論
        參考文獻
全文總結
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]1種高效納米抗體生產方法的建立[J]. 賀生芳,付向晶,劉陽坤,慕國輝,劉海金,王興龍,杜恩岐,楊增岐.  畜牧獸醫(yī)學報. 2013(09)
[2]瑞普生物豬PCV2滅活疫苗上市新聞發(fā)布會側記[J]. 趙建樂,徐兆強,尤永君.  中國動物保健. 2013(06)
[3]羊駝非免疫重鏈單域抗體庫的構建和鑒定[J]. 吳標,王樹軍,夏立亮,季萍,葛海良,趙國屏,王穎.  現代免疫學. 2011(05)
[4]駝源天然單域重鏈抗體庫的構建與鑒定[J]. 涂追,許楊,劉夏,何慶華,陶勇.  中國生物工程雜志. 2011(04)
[5]駱駝來源單域抗體在免疫治療中的研究進展[J]. 蘇幼紅,李江偉.  生物技術通報. 2010(06)
[6]豬圓環(huán)病毒核酸疫苗pcDNA-PCV-ORF2-ISS的構建及分子佐劑聯合免疫研究[J]. 張建遠,王紅寧,陳錦銳,高榮,黃勇,羅昊,陳建林,鄭敏.  中國獸醫(yī)學報. 2009(12)
[7]嵌合型豬圓環(huán)病毒（PCV1-2）及PCV2 ORF2真核表達質粒對商品豬的免疫保護[J]. 程旭,宋益,盛瑜,高崧,劉秀梵.  中國獸醫(yī)學報. 2009(09)
[8]利用乳酸乳球菌AcmA表面展示β-1,3-1,4-葡聚糖酶[J]. 李小華,黃新鳳,邵小虎,李林.  生物工程學報. 2009(01)
[9]含CpG基序系列豬圓環(huán)病毒核酸疫苗的構建[J]. 程凱慧,李俊,于周,周順,王金寶.  中國獸醫(yī)科學. 2008(12)
[10]豬圓環(huán)病毒2型檢測與免疫技術研究進展[J]. 蔡寶祥.  畜牧與獸醫(yī). 2008(09)

博士論文
[1]豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白的家蠶表達及亞單位疫苗在小鼠和仔豬的免疫效力試驗[D]. 郎洪武.中國農業(yè)大學 2013
[2]豬圓環(huán)病毒2型衣殼蛋白病毒樣顆粒的制備及其免疫原性的研究[D]. 尹雙輝.中國農業(yè)科學院 2011

碩士論文
[1]豬圓環(huán)病毒2型GEM顆粒疫苗的初步研究[D]. 喬緒穩(wěn).揚州大學 2013
[2]豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白的表達及其免疫原性研究[D]. 王霞.南京農業(yè)大學 2012
[3]豬圓環(huán)病毒2結構蛋白Cap的高效可溶性表達及應用[D]. 葛猛.湖南農業(yè)大學 2009
[4]利用AcmA蛋白在乳酸乳球菌表面展示錳超氧化物歧化酶[D]. 黃新鳳.華中農業(yè)大學 2009



本文編號：3361908