豬圓環(huán)病毒相關(guān)疾病（porcine circovirus-associated disease,PCVAD）的免疫預(yù)防具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。我國(guó)國(guó)產(chǎn)PCV2疫苗均系PK15細(xì)胞增殖PCV2病毒、配用油佐劑制備而成,臨床免疫副反應(yīng)大。一般認(rèn)為,免疫副反應(yīng)多是因抗原不純引起的,另外,游離狀態(tài)的PCV2病毒DNA可能引發(fā)免疫抑制。因此,研究PCV2抗原的濃縮純化技術(shù),提升國(guó)產(chǎn)疫苗質(zhì)量,具有重要意義與實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。GEM表面展示系統(tǒng)是國(guó)外近年發(fā)展起來(lái)的一種抗原制備新技術(shù)。該技術(shù)包括GEM 顆粒（Gram-positive bacterial enhancer matrix particles）和蛋白錨鉤（Protein anchor,PA）兩個(gè)構(gòu)件。GEM顆粒是乳酸乳球菌MG1363經(jīng)熱酸煮沸處理,去除其全部蛋白和核酸等物質(zhì)后獲得的球形細(xì)胞壁肽聚糖骨架。蛋白錨鉤PA是N-乙酰氨基葡萄糖苷酶的一個(gè)結(jié)構(gòu)域,可以非共價(jià)方式與GEM顆粒結(jié)合。大量研究表明,與PA融合表達(dá)的目標(biāo)蛋白可以展示在GEM顆粒表面。因此,設(shè)計(jì)并表達(dá)PA與病毒特異性納米抗體的融合蛋白,GEM技術(shù)便可拓展應(yīng)用于病毒抗原的濃縮純化。本研... 

【文章來(lái)源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：99 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
英文縮略詞表
上篇 文獻(xiàn)綜述
    第一章 GEM表面展示系統(tǒng)的研究進(jìn)展
        1 乳酸乳球菌表面展示系統(tǒng)
        2 GEM表面展示系統(tǒng)
            2.1 GEM顆粒
            2.2 PA蛋白
        3 GEM表面展示系統(tǒng)在疫苗研發(fā)中的應(yīng)用
        4 展望
        參考文獻(xiàn)
    第二章 納米抗體的研究進(jìn)展
        1 納米抗體的結(jié)構(gòu)
        2 納米抗體的特性
            2.1 溶解性好、穩(wěn)定性高
            2.2 可識(shí)別獨(dú)特的構(gòu)造表位
            2.3 表達(dá)量高
            2.4 其他特性
        3 納米抗體的應(yīng)用
            3.1 構(gòu)建納米抗體庫(kù)與特異性納米抗體的篩選
            3.2 動(dòng)物疾病的應(yīng)用
        參考文獻(xiàn)
    第三章 豬圓環(huán)病毒2型疫苗研究進(jìn)展
        1 PCV2病原學(xué)及分子生物學(xué)研究
        2 PCV2疫苗研究
            2.1 滅活疫苗
            2.2 減毒活疫苗
            2.3 重組亞單位疫苗
            2.4 載體疫苗
            2.5 核酸疫苗
        3 PCV2疫苗存在的問(wèn)題
        4 展望
        參考文獻(xiàn)
下篇 試驗(yàn)研究
    第四章 GEM-PCV2純化系統(tǒng)基礎(chǔ)構(gòu)件的制備
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果
            2.1 GEM顆粒電鏡觀察鑒定
            2.2 重組質(zhì)粒pZQ-PA-Nb的鑒定
            2.3 接頭融合蛋白的SDS-PAGE鑒定與可溶性鑒定
            2.4 包涵體復(fù)性與活性SDS-PAGE鑒定
            2.5 GEM-Pb電鏡觀察鑒定
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
    第五章 PCV2病毒-GEM純化方法的建立
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果
            2.1 GEM-Pb與PCV2病毒的結(jié)合后SDS-PAGE分析
            2.2 GEM-Pb與PCV2病毒結(jié)合的鑒定
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
    第六章 GEM-PCV2疫苗免疫保護(hù)效力研究
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果
            2.1 PCV2特異性抗體水平檢測(cè)結(jié)果
            2.2 攻毒保護(hù)試驗(yàn)結(jié)果
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
    第七章 PCV2-VLP-GEM純化方法的建立
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果
            2.1 重組Cap蛋白的SDS-PAGE鑒定與可溶性鑒定
            2.2 重組Cap蛋白體外形成VLP的電鏡觀察
            2.3 GEM-Pb與PCV2-VLP結(jié)合的鑒定
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
全文總結(jié)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]1種高效納米抗體生產(chǎn)方法的建立[J]. 賀生芳,付向晶,劉陽(yáng)坤,慕國(guó)輝,劉海金,王興龍,杜恩岐,楊增岐.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2013(09)
[2]瑞普生物豬PCV2滅活疫苗上市新聞發(fā)布會(huì)側(cè)記[J]. 趙建樂(lè),徐兆強(qiáng),尤永君.  中國(guó)動(dòng)物保健. 2013(06)
[3]羊駝非免疫重鏈單域抗體庫(kù)的構(gòu)建和鑒定[J]. 吳標(biāo),王樹(shù)軍,夏立亮,季萍,葛海良,趙國(guó)屏,王穎.  現(xiàn)代免疫學(xué). 2011(05)
[4]駝源天然單域重鏈抗體庫(kù)的構(gòu)建與鑒定[J]. 涂追,許楊,劉夏,何慶華,陶勇.  中國(guó)生物工程雜志. 2011(04)
[5]駱駝來(lái)源單域抗體在免疫治療中的研究進(jìn)展[J]. 蘇幼紅,李江偉.  生物技術(shù)通報(bào). 2010(06)
[6]豬圓環(huán)病毒核酸疫苗pcDNA-PCV-ORF2-ISS的構(gòu)建及分子佐劑聯(lián)合免疫研究[J]. 張建遠(yuǎn),王紅寧,陳錦銳,高榮,黃勇,羅昊,陳建林,鄭敏.  中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2009(12)
[7]嵌合型豬圓環(huán)病毒（PCV1-2）及PCV2 ORF2真核表達(dá)質(zhì)粒對(duì)商品豬的免疫保護(hù)[J]. 程旭,宋益,盛瑜,高崧,劉秀梵.  中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2009(09)
[8]利用乳酸乳球菌AcmA表面展示β-1,3-1,4-葡聚糖酶[J]. 李小華,黃新鳳,邵小虎,李林.  生物工程學(xué)報(bào). 2009(01)
[9]含CpG基序系列豬圓環(huán)病毒核酸疫苗的構(gòu)建[J]. 程凱慧,李俊,于周,周順,王金寶.  中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2008(12)
[10]豬圓環(huán)病毒2型檢測(cè)與免疫技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 蔡寶祥.  畜牧與獸醫(yī). 2008(09)

博士論文
[1]豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白的家蠶表達(dá)及亞單位疫苗在小鼠和仔豬的免疫效力試驗(yàn)[D]. 郎洪武.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[2]豬圓環(huán)病毒2型衣殼蛋白病毒樣顆粒的制備及其免疫原性的研究[D]. 尹雙輝.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2011

碩士論文
[1]豬圓環(huán)病毒2型GEM顆粒疫苗的初步研究[D]. 喬緒穩(wěn).揚(yáng)州大學(xué) 2013
[2]豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白的表達(dá)及其免疫原性研究[D]. 王霞.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[3]豬圓環(huán)病毒2結(jié)構(gòu)蛋白Cap的高效可溶性表達(dá)及應(yīng)用[D]. 葛猛.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009
[4]利用AcmA蛋白在乳酸乳球菌表面展示錳超氧化物歧化酶[D]. 黃新鳳.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009



本文編號(hào)：3361908