發(fā)布時(shí)間：2021-08-24 15:04

　　目的：布魯氏菌�。˙rucellosis）由是布魯氏菌屬（Brucella）成員引起的一種人畜共患傳染病，通常能夠長期持續(xù)的感染人畜，引起生殖器官損傷，一旦感染，難以治愈。布魯氏菌病在全世界廣泛存在爆發(fā)的情況下，給人類健康安全和農(nóng)牧業(yè)經(jīng)濟(jì)都造成了巨大的威脅和損失，而且還可被作為一種恐怖戰(zhàn)劑。布魯氏菌是胞內(nèi)寄生菌，革蘭氏陰性菌，主要以胚胎滋養(yǎng)層細(xì)胞核巨噬細(xì)胞為宿主細(xì)胞。布魯氏菌不產(chǎn)生外毒素，其毒力主要表現(xiàn)在侵襲力以及在宿主內(nèi)的生存和繁殖能力。布魯氏菌抑制巨噬細(xì)胞凋亡是其能夠在宿主體內(nèi)生長繁殖而不被機(jī)體免疫系統(tǒng)識別清除的主要原因。因此，通過對布魯氏菌誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡的機(jī)制的研究是研究布魯氏菌病致病機(jī)制的基礎(chǔ)。方法：（1）以布魯氏菌強(qiáng)毒株16M、疫苗株M5-90感染巨噬細(xì)胞RAW264.7模型，建立布魯氏菌株誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡機(jī)制提供最佳感染復(fù)數(shù)。（2）布魯氏菌強(qiáng)毒株16M、疫苗株M5-90分別以最佳感染復(fù)數(shù)感染巨噬細(xì)胞RAW264.7，比較強(qiáng)弱毒株誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡的差異。（3）根據(jù)強(qiáng)弱毒株誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡的差異，選取促進(jìn)凋亡的菌株，探究caspase3、8、9在其誘導(dǎo)凋亡中的作用。（4）檢測... 

【文章來源】：石河子大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
前言
第一章 文獻(xiàn)綜述 布魯氏菌在巨噬細(xì)胞致病機(jī)制的初步研究
    1、布魯氏菌生物學(xué)特性
    2、布魯氏菌的致病機(jī)制
        2.1 布魯氏菌毒力因子
        2.2 布魯氏菌的調(diào)理與非調(diào)理生活方式
        2.3 布魯氏菌與自噬
        2.4 布魯氏菌與凋亡
第二章 實(shí)驗(yàn)研究
    實(shí)驗(yàn)一 布魯氏菌強(qiáng)毒株16M、疫苗株M5-90感染RAW264.7凋亡模型的建立
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 菌株與質(zhì)粒
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器
            1.4 試驗(yàn)方法
                1.4.1 巨噬細(xì)胞RAW264.7的培養(yǎng)
                1.4.2 布魯氏菌強(qiáng)毒株16M、疫苗株M5-90菌株培養(yǎng)及鑒定
                1.4.3 布魯氏菌強(qiáng)毒株16M、疫苗株M5-90不同時(shí)間不同感染復(fù)數(shù)感染巨噬細(xì)胞RAW264.7凋亡率
        2 結(jié)果
            2.1 巨噬細(xì)胞的培養(yǎng)
            2.2 布魯氏菌株P(guān)CR鑒定
            2.3 布魯氏菌強(qiáng)毒株16M、疫苗株M5-90誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞RAW264.7凋亡模型的建立
            2.4 不同時(shí)間布魯氏菌胞內(nèi)CFU計(jì)數(shù)
        3. 討論
            3.1 布魯氏菌與巨噬細(xì)胞
            3.2 布魯氏菌感染模型
            3.3 布魯氏菌強(qiáng)毒株16M與疫苗株M5-90的比較
        4 結(jié)論
    實(shí)驗(yàn)二 Caspae3、8、9對布魯氏菌誘導(dǎo)RAW264.7凋亡的影響
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 菌株和細(xì)胞
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器
            1.4 方法
                1.4.1 布魯氏菌強(qiáng)疫苗株誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡率
                1.4.2 感染細(xì)胞caspase3、8、9表達(dá)量檢測
                1.4.3 caspase3、8、9對凋亡的影響
                1.4.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
        2 結(jié)果
            2.1 布魯氏菌強(qiáng)毒株16M、疫苗株M5-90誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡率
            2.2 M5-90感染RAW264.7巨噬細(xì)胞24h后Caspase3、8、9的表達(dá)量
            2.3 抑制Caspase3、8、9后細(xì)胞感染24h凋亡率
        3 討論
        4 結(jié)論
    實(shí)驗(yàn)三 布魯氏菌強(qiáng)毒株16M、疫苗株M5-90誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡線粒體途徑相關(guān)因子的表達(dá)比較
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 細(xì)菌和細(xì)胞
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器
            1.4 方法
                1.4.1 細(xì)胞培養(yǎng)
                1.4.2 ELISA檢測布魯氏菌強(qiáng)疫苗株感染巨噬細(xì)胞后TNF-a、cytc的表達(dá)變化
                1.4.3 實(shí)時(shí)定量PCR檢測AIF、Bcl-2、Bax、Apaf-1、Bcl-xl的表達(dá)變化
        2 結(jié)果
            2.1 TNF-a和Cytc標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作
            2.2 強(qiáng)疫苗株感染巨噬細(xì)胞后細(xì)胞內(nèi)TNF-a和Cytc表達(dá)量
            2.3 實(shí)時(shí)定量PCR檢測AIF、Bcl-2、Bax、Apaf-1、Bcl-xl的變化
            2.4 激光共聚焦檢測Cytc共定位情況
        3 討論
            3.1 布魯氏菌與凋亡
            3.2 布魯氏菌與線粒體途徑相關(guān)凋亡因子
        4 結(jié)論
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
導(dǎo)師評閱表


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]布魯氏菌的致病機(jī)制與細(xì)胞免疫機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 董炳梅,王金良,唐娜,苗立中,沈志強(qiáng).  中國人獸共患病學(xué)報(bào). 2012(06)
[2]布魯氏菌病流行趨勢及其防治措施的研究進(jìn)展[J]. 陳丹,柳曉琳,劉孝剛,程曉萍.  中國地方病防治雜志. 2011(01)
[3]傷寒沙門菌誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡機(jī)制的探討[J]. 劉婷婷,馬麗娜,李鳳云,劉勇,樊蓉.  中國人獸共患病學(xué)報(bào). 2010(03)
[4]布魯氏菌病的流行、發(fā)病原因及防治進(jìn)展[J]. 周艷彬,柳曉琳.  遼寧醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2010(01)
[5]AIF、Bax和Bcl-2在中子及γ射線照射致腸道損傷中的表達(dá)[J]. 王瑞娟,彭瑞云,高亞兵,徐新萍,常公民,馬俊杰,李楊,王水明.  解放軍醫(yī)學(xué)雜志. 2009(11)
[6]布魯氏菌強(qiáng)毒株16M和疫苗株M5差異探索[J]. 趙振祥,趙鴻雁,崔步云,李蘭玉,樸冬日,郝素珍.  中國人獸共患病學(xué)報(bào). 2009(10)
[7]細(xì)胞凋亡信號傳導(dǎo)通路的研究進(jìn)展[J]. 楊紹杰,孟金萍,屈祎,劉云波.  中國比較醫(yī)學(xué)雜志. 2007(05)
[8]細(xì)胞凋亡調(diào)控基因bcl-2和bax在腎上腺髓質(zhì)增生大鼠腎上腺組織中的表達(dá)與意義[J]. 朱述琳,侯棟梁,薛現(xiàn)霞,邢佑敏.  西部醫(yī)學(xué). 2005(05)
[9]細(xì)胞凋亡通路研究進(jìn)展[J]. 王海燕,王來栓.  國外醫(yī)學(xué)(生理、病理科學(xué)與臨床分冊). 2003(05)
[10]動(dòng)物布魯氏菌病防治研究進(jìn)展[J]. 毛開榮.  中國獸藥雜志. 2003(09)

碩士論文
[1]羊種布魯氏菌強(qiáng)毒株16M與疫苗株M5差異蛋白質(zhì)組學(xué)分析[D]. 顧超慧.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009



本文編號：3360215