東北虎源細(xì)小病毒是由貓泛白細(xì)胞減少癥病毒（Feline panleucopenia virus,FPV）引起的一種急性和致死性極高的傳染病。又稱貓泛白細(xì)胞減少癥、貓瘟熱病毒、貓細(xì)小病毒、貓傳染性腸炎病毒。在自然條件下,可感染熊、虎、水貂、豹等多種食肉類動(dòng)物,該病發(fā)病過程急、患病過程短、傳染性和死亡率較高。FPV的爆發(fā)在很大程度上對(duì)特種經(jīng)濟(jì)動(dòng)物以及野生動(dòng)物造成威脅,因此控制FPV在我國(guó)的流行、診斷和預(yù)防具有重要的意義本研究以黑龍江省某虎林園的東北虎糞便為研究對(duì)象,該虎具有出血性腸炎,精神萎靡等癥狀。通過病毒分離鑒定、動(dòng)物回歸試驗(yàn)及分子生物學(xué)檢測(cè)等方法,證明東北虎的發(fā)病原是東北虎源細(xì)小病毒,命名為FPV-HER-NEFU。細(xì)小病毒NS1蛋白在病毒的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄過程中起重要作用。研究NS1基因?qū)?xì)小病毒的生物學(xué)特性及診斷預(yù)防等方面研究具有指導(dǎo)意義。本研究對(duì)分離的東北虎源細(xì)小病毒NS1全長(zhǎng)基因進(jìn)行克隆,并對(duì)其編碼的蛋白進(jìn)行生物信息學(xué)分析和構(gòu)建分子遺傳進(jìn)化樹。成功擴(kuò)增2007bp靶基因并連接到表達(dá)載體pGEX-6P-1中以構(gòu)建重組表達(dá)載體pGEX-FPV-NS1。將陽(yáng)性重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌感受態(tài)... 

【文章來(lái)源】：東北林業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１細(xì)小病毒病毒粒子立體模式圖??Ｆｉｇ．?１－１?３Ｄ?ｍｏｄｅｌ?ｏｆ?ｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ?ｖｉｒｉｏｎ??

?囊Ｉ??圖１－１細(xì)小病毒病毒粒子立體模式圖??Ｆｉｇ．?１－１?３Ｄ?ｍｏｄｅｌ?ｏｆ?ｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ?ｖｉｒｉｏｎ??１．１．２細(xì)小病毒的培養(yǎng)特性及基因組結(jié)構(gòu)??ＦＰＶ可以在組織細(xì)胞中增殖，例如幼貓的脾、心、腎、睪丸、肺、腎上腺、腸、骨??骼和淋巴結(jié)等。它也可用于Ｆ８１貓腎傳代細(xì)胞、ＣＲＦＫ貓腎傳代細(xì)胞、ＮＬＦＫ貓腎傳代??細(xì)胞等％?１５１。與其它細(xì)小病毒一樣，使用傳代培養(yǎng)的方法進(jìn)行分離病毒［１６１。細(xì)小病毒??是自主復(fù)制單股線性ＤＮＡ病毒，ＯＲＦ?ＮＳ和ＯＲＦ?Ｓ主要具有兩個(gè)開放性閱讀框??（ＯＲＦ），其基因組中含有兩個(gè)啟動(dòng)子，可以啟動(dòng)結(jié)構(gòu)蛋白（ＶＰ１和ＶＰ２）和非結(jié)構(gòu)??蛋白（ＮＳ１和ＮＳ２）編碼基因進(jìn)行轉(zhuǎn)錄［１７，１８］。是基因組的兩個(gè)主要的開放閱讀框??ＯＲＦ。兩個(gè)ＯＲＦ間隔７ｂｐ。ＯＲＦ?ＮＳ編碼非結(jié)構(gòu)蛋白，主要參與基因組復(fù)制和轉(zhuǎn)錄。??ＯＲＦ?Ｓ編碼病毒的結(jié)構(gòu)蛋白，其參與病毒體的組裝并構(gòu)成病毒［１９’２（）］。??ｒｖ?ｐａ??ｖ?ｒｒ?（ｒ＾??ＮＳｌ?＆?ＨＳ２??—＾—??Ｌ

Ｉ要求較嚴(yán)格，需要設(shè)立陰陽(yáng)性對(duì)照，容易出現(xiàn)假陽(yáng)性的情況，鑒定ＰＣＲ產(chǎn)物是否正確。在實(shí)驗(yàn)過程中需要規(guī)范的操作，ＰＣＲ此在很大程度上限制了其在臨床獸醫(yī)的推廣應(yīng)用。??亡的研究進(jìn)展??凋亡的概述??亡是程序性細(xì)胞死亡（ＰＣＤ）過程，其中細(xì)胞在特定的內(nèi)源和基因調(diào)節(jié)。細(xì)胞凋亡的特征在于細(xì)胞大小減少，與周圍的細(xì)胞，線粒體膜電位消失，通透性改變，細(xì)胞質(zhì)濃縮，細(xì)胞膜和解；可以觀察到細(xì)胞膜有囊泡形成，最終可以觀察到凋亡細(xì)胞亡是嚴(yán)格控制物種中高度保守的基因的過程，例如半胱天冬酶ｙｃ致癌基因和腫瘤抑制基因ｐ５３｜Ｗ］。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)過程，但細(xì)胞凋亡的確切機(jī)制尚不完全清楚。凋亡過程的紊亂有關(guān)，如腫瘤，自身免疫性疾病，病毒感染等［６４，６５］。??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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[8]藏獒源犬細(xì)小病毒的分離鑒定及其VP2基因序列分析[D]. 梁璐琪.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
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[10]鵝細(xì)小病毒NS基因PCR和單抗競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用[D]. 王倩.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011



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