本研究為建立牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）抗體間接ELISA方法,根據(jù)GenBank公布的BVDVE2基因序列,利用DNAstar等軟件進行生物信息學(xué)分析,截取抗原性和親水性較高的序列,將其進行稀有密碼子優(yōu)化,串聯(lián)信號肽序列后送公司合成并連接到原核表達載體pET-32a（+）,構(gòu)建重組質(zhì)粒pET-32a-Opti-E2,鑒定正確后,轉(zhuǎn)化至E.coli BL21（DE3）宿主菌,IPTG 誘導(dǎo)表達,經(jīng) SDS-PAGE 和 Western Blot 分析,成功獲得大小為43 kDa BVDV E2基因的可溶性蛋白。應(yīng)用可溶性表達的E2蛋白作為包被抗原,建立并優(yōu)化了檢測BVDV抗體的間接ELISA方法,命名為Opti-E2-ELISA。采用受試者工作特征曲線方法對203份血清的S/P值進行分析,確定Opti-E2-ELISA的陰陽性臨界值為0.21。當(dāng)S/P值為0.21時,此方法的敏感性為96.97%,特異性為97.65%。用Opti-E2-ELISA方法檢測牛傳染性鼻氣管炎病毒陽性血清、�？谔阋卟《娟栃匝�、布魯菌陽性血清、牛副結(jié)核分支桿菌陽性血清,結(jié)果均為陰性,表明此方法特異性良好。批間... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１?ＢＶＤＶ基因組結(jié)構(gòu)意圖??Ｆｉ．?１?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃｉａｒａｍ?ｏｆ?ＢＶＤＶｅｎｏｍｅ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ??

2蛋白的親水性、杭原性和表面可及性的預(yù)測

圖４重組表達質(zhì)粒雙酶切鑒定??

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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[9]牛病毒性腹瀉病毒重組E2蛋白多克隆抗體制備及間接ELISA方法的建立與應(yīng)用[D]. 高欲燃.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
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本文編號：3350503