禽流感（avian influenza, AI）是由A型流感病毒（AIV）感染家禽后引起的各種綜合征。A型流感病毒目前有17種血凝素（HA）和10種神經(jīng)氨酸酶（NA）,根據(jù)HA和NA分為不同的亞型。2013年2月,中國(guó)出現(xiàn)了一種由H7N9亞型禽流感病毒引起的疫情,共造成幾十人死亡,對(duì)人類(lèi)健康和養(yǎng)禽業(yè)構(gòu)成極大威脅。由于該病傳播迅速,確診方法繁瑣和確診時(shí)間長(zhǎng),因此,研究對(duì)該病的快速診斷方法顯得尤為重要和急迫。1.H7亞型高致病性禽流感病毒單抗的制備本研究通過(guò)超速離心法純化的H7N9亞型AIV用甲醛滅活,作為免疫抗原免疫6周齡BALB/c雌性小鼠,制備陽(yáng)性血清；同時(shí)將純化的病毒作為包被抗原包被酶標(biāo)板,建立間接ELISA檢測(cè)方法用于單抗篩選。通過(guò)試驗(yàn)優(yōu)化建立間接ELISA方法的檢測(cè)條件�？乖钸m包被濃度為1：1600,最佳包被條件為37℃作用1h后4℃過(guò)夜,抗原最佳封閉時(shí)間為40mmin；血清最佳稀釋度為1：400,血清作用時(shí)間為30min；酶標(biāo)二抗最佳稀釋度為1：10000,作用時(shí)間為2h;底物顯色時(shí)問(wèn)為15min.通過(guò)皮下注射法連續(xù)三次免疫BALB/c鼠,免疫間隔時(shí)間為14天,三免后10天... 

【文章來(lái)源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：87 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語(yǔ)表
第一篇 文獻(xiàn)綜述
    第一章 禽流感病毒的研究進(jìn)展
        1 禽流感簡(jiǎn)述
        2 禽流感病毒的形態(tài)結(jié)構(gòu)及其基因組
            2.1 禽流感病毒的形態(tài)結(jié)構(gòu)
            2.2 流感病毒致病性的分子基礎(chǔ)
        3 禽流感流行病學(xué)
            3.1 禽流感流行情況
            3.2 H7N9亞型禽流感流行情況
        4 禽流感的診斷與防治
            4.1 病原學(xué)診斷方法
            4.2 禽流感的防治
        5 研究目的與意義
        參考文獻(xiàn)
    第二章 單克隆抗體的研究進(jìn)展
        1 單克隆抗體的制備原理
        2 單克隆抗體的研究進(jìn)展
            2.1 鼠源性抗體
            2.2 嵌合抗體
            2.3 人源化抗體
            2.4 人源性抗體
        3 單克隆抗體的應(yīng)用
            3.1 疾病的診斷和防治
            3.2 疫苗的生產(chǎn)
            3.3 免疫學(xué)的基礎(chǔ)研究
            3.4 抗原純化方面
        4 單克隆抗體在禽流感中的應(yīng)用
        參考文獻(xiàn)
第二篇 試驗(yàn)部分
    第三章 H7亞型高致病性禽流感病毒單抗的制備
        摘要
        1 材料
            1.1 毒株
            1.2 SPF雞胚
            1.3 動(dòng)物及細(xì)胞
            1.4 試劑
            1.5 主要儀器與耗材
        2 方法
            2.1 病毒的制備
            2.2 病毒的純化
            2.3 動(dòng)物免疫
            2.4 間接ELISA方法的建立
            2.5 單克隆抗體的制備
            2.6 細(xì)胞的凍存和復(fù)蘇
            2.7 單抗的大量制備
            2.8 單抗的鑒定
        3 結(jié)果
            3.1 純化病毒蛋白含量的測(cè)定
            3.2 建立間接ELISA方法
            3.3 雜交瘤細(xì)胞株的建立
            3.4 細(xì)胞的復(fù)蘇
            3.5 單克隆抗體的鑒定
        4 討論
            4.1 制備抗原的方法
            4.2 影響細(xì)胞融合的因素
            4.3 陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞的篩選
            4.4 單克隆抗體特異性鑒定
            4.5 單克隆抗體在檢測(cè)禽流感病毒中的應(yīng)用
        參考文獻(xiàn)
        ABSTRACT
    第四章 H7型禽流感病毒單克隆抗體膠體金免疫層析檢測(cè)試紙條的研制
        摘要
        1 材料
            1.1 毒株
            1.2 試驗(yàn)試劑
            1.3 主要儀器
            1.4 膠體金免疫層析試紙條的制備材料
        2 方法
            2.1 單克隆抗體的制備
            2.2 腹水的純化
            2.3 兔抗H7型禽流感病毒多克隆抗體的制備
            2.4 免疫膠體金的制備
            2.5 膠體金免疫層析檢測(cè)試紙條的初步組裝與使用
            2.6 膠體金免疫層析試紙條的應(yīng)用
        3 結(jié)果
            3.1 5D_2的純化
            3.2 兔抗H7亞型禽流感病毒多克隆血清抗體的制備
            3.3 確定膠體金標(biāo)記抗體的相關(guān)條件
            3.4 膠體金免疫層析試紙條相關(guān)條件的探索
            3.5 膠體金免疫層析試紙條的鑒定
        4 討論
            4.1 單抗腹水及多抗的純化
            4.2 膠體金免疫層析檢測(cè)試紙條的研制
        參考文獻(xiàn)
        ABSTRACT
全文小結(jié)
附錄
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]H9亞型鴨源禽流感病毒SYBR GreenⅠ實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR快速檢測(cè)方法的建立[J]. 萬(wàn)春和,林甦,施少華,林秋敏,陳紅梅,程龍飛,傅光華,林芳,林建生,黃瑜.  福建農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2010(04)
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[5]犬細(xì)小病毒病免疫膠體金診斷技術(shù)的研究[J]. 王中力,宋曉暉,陳西召,陳國(guó)勝.  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2004(01)
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[8]禽流感的歷史和公共衛(wèi)生意義[J]. 鄭騰,陳枝華.  生物學(xué)通報(bào). 2002(04)
[9]禽流感病毒重組核蛋白ELISA診斷技術(shù)的研究[J]. 李海燕,于康震,辛?xí)怨?鄧國(guó)華.  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2000(03)
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