發(fā)布時(shí)間：2021-08-17 14:38

　　本研究旨在研制一種牛血清淀粉樣蛋白A（SAA）時(shí)間分辨熒光免疫層析定量檢測(cè)試劑盒,用于牛奶中SAA含量的臨床快速檢測(cè)。采用雙抗體夾心法結(jié)合熒光免疫層析技術(shù),在結(jié)合墊上固定熒光微球標(biāo)記的抗SAA單克隆抗體及熒光微球標(biāo)記的雞IgY的混合物,在硝酸纖維素膜的檢測(cè)區(qū)包被另一株抗SAA單克隆抗體,在硝酸纖維素膜的質(zhì)控區(qū)包被山羊抗雞IgY。經(jīng)抗體原料篩選及熒光微球標(biāo)記抗體的工藝優(yōu)化后,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并對(duì)試劑盒的空白限、精密度、穩(wěn)定性及樣本測(cè)試性能進(jìn)行初步評(píng)估。結(jié)果顯示,Medix SAA-2單克隆抗體包被與YBX SAA-3單克隆抗體標(biāo)記為最適抗體配對(duì)原料。熒光微球標(biāo)記抗體的工藝中,熒光微球與抗體的質(zhì)量投料比為40∶1、偶聯(lián)劑與熒光微球羧基摩爾比為2∶1的條件為最優(yōu)組合。試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線的四參數(shù)擬合曲線方程為y=（1.03947-0.00182）/[1+（x/12.08222）×（-0.84692）]+0.00182,線性相關(guān)系數(shù)R²=0.9997。研制的牛SAA檢測(cè)試劑盒空白限為0.052 mg/L。精密度測(cè)試結(jié)果顯示,批內(nèi)變異系數(shù)<15%,批間變異系數(shù)<20%。室... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2020,47(04)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：8 頁(yè)

【部分圖文】：

熒光微球標(biāo)記抗體的抗體用量篩選

熒光微球標(biāo)記抗體的偶聯(lián)劑用量篩選

圖2 熒光微球標(biāo)記抗體的偶聯(lián)劑用量篩選表2 牛SAA檢測(cè)試劑盒精密度結(jié)果Table 2 Precision of bovine SAA detection kit 濃度Concentration/(mg/L) 批內(nèi)試驗(yàn) Intra-assay 批間試驗(yàn) Inter-assay 濃度平均值±標(biāo)準(zhǔn)差Mean concentration±SD/(mg/L) CV/% 濃度平均值±標(biāo)準(zhǔn)差Mean concentration±SD/(mg/L) CV/% 2 2.17±0.21 9.8 2.13±0.23 10.7 50 51.33±6.25 12.2 52.42±8.34 15.9

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]乳房及肢蹄潔凈度對(duì)荷斯坦奶牛體細(xì)胞數(shù)的影響[J]. 尤震晨,王夕虎,葛建軍,趙番番,胥磊,王丹,張夢(mèng)華,張曉雪,姜徽,黃錫霞.  中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2019(08)
[2]抗菌肽NZ2114對(duì)奶牛乳房炎源金黃色葡萄球菌細(xì)胞膜、基因組和耐藥性的影響[J]. 郭英,滕達(dá),王秀敏,毛若雨,郝婭,范寰,王建華.  中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2019(04)
[3]乳清急性期蛋白、乳酶作為奶牛隱性乳腺炎診斷指標(biāo)的研究[J]. 薛永康,閆磊,張震,趙玉璽,虎嘯,朱邯豫,王新莊.  中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2018(08)
[4]奶牛乳房炎實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 高原,張博,姚偉.  現(xiàn)代畜牧獸醫(yī). 2018(04)
[5]CA19-9時(shí)間分辨熒光免疫層析檢測(cè)方法的建立[J]. 王云龍,米亞雙,李玉林,王繼創(chuàng),程蕾,閆生輝,鄧?yán)枥?  生物工程學(xué)報(bào). 2018(06)
[6]奶牛乳房炎病原菌診斷技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 王丹,楊峰,李新圃,羅金印,劉龍海,張哲,張亞茹,張莉莉,李宏勝.  中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2017(06)
[7]奶牛乳房炎及其防治[J]. 劉來(lái)欽.  畜牧獸醫(yī)科技信息. 2016(09)
[8]我國(guó)奶牛隱性乳房炎診斷方法的研究現(xiàn)狀[J]. 尹柏雙,付連軍,郝景鋒,宋永利,沙萬(wàn)里,李靜姬.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2014(11)
[9]奶牛乳房炎主要病原菌基因檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 韓旭,武瑞,孫東波.  中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2012(03)
[10]不同程度奶牛乳腺炎乳中血清淀粉樣蛋白A的變化[J]. 張思學(xué),彭立穎,王洪偉,高利.  中國(guó)獸醫(yī)雜志. 2011(12)

碩士論文
[1]奶牛乳腺炎快速診斷技術(shù)的應(yīng)用與隱性乳腺炎診斷指標(biāo)的探索[D]. 薛永康.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[2]奶牛乳房炎對(duì)乳酶活性、急性期蛋白含量的影響及其作為隱性乳房炎診斷指標(biāo)的研究[D]. 楊德英.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009



本文編號(hào)：3347953