本論文以內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)室保存的Pediococcus acidilactici R-4（從日本處理有機(jī)廢棄物中分離篩選）為研究對(duì)象,采用牛津杯法對(duì)Pediococcus acidilactici R-4培養(yǎng)液進(jìn)行酸性產(chǎn)物及H2O2產(chǎn)物排除試驗(yàn)、蛋白酶水解試驗(yàn)、酸堿穩(wěn)定性試驗(yàn)等認(rèn)為該菌產(chǎn)生的抗菌物質(zhì)可能為細(xì)菌素。為進(jìn)一步探索Pediococcus acidilactici R-4的抑菌機(jī)理,從分子水平檢測(cè)其片球菌素操縱子,本試驗(yàn)以提取的Pediococcus acidilactici R-4全基因組為模板,根據(jù)GenBank（M83924）發(fā)布的pediocin PA-1基因中PedA結(jié)構(gòu)序列設(shè)計(jì)合成一對(duì)特異性引物,利用PCR技術(shù)從基因組DNA中擴(kuò)增出目的片段,經(jīng)回收純化后將目的片段連接于pMD19-T載體上,并轉(zhuǎn)化到E.coli DH5α感受態(tài)中。經(jīng)驗(yàn)證篩選,對(duì)陽(yáng)性克隆進(jìn)行鑒定分析,克隆到pET-32a（+）表達(dá)載體轉(zhuǎn)入E.coli BL21（DE3）感受態(tài)中,經(jīng)過(guò)Amp+平皿篩選,質(zhì)粒雙酶切鑒定和菌落PCR兩步驗(yàn)證,成功獲得重組陽(yáng)性質(zhì)粒,利用IPTG誘導(dǎo)表達(dá)感受態(tài)E.col... 

【文章來(lái)源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁(yè)數(shù)】：48 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２?Ｐｅｄｉｏｃｏｃｉｎ?ＰＡ－１操縱子結(jié)構(gòu)基因圖??Ｆｉｇ．２?Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ?ｇｅｎｅ?ｍａｐ?ｏｆ?Ｐｅｄｉｏｃｏｃｉｎ?ＰＡ－１??１．４．３?Ｉｌａ類乳酸菌素作用方式??

?內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文?２５??圖６酶敏感性試驗(yàn)結(jié)果圖??Ｆｉｇ．６?Ｅｎｚｙｍｅ?ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ?ｔｅｓｔ?ｒｅｓｕｌｔ?ｇｒａｔｈ??ｌ．Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ?ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ?Ｒ－４培養(yǎng)液；２．胃蛋白酶處理；３．胰蛋白酶處理；４．對(duì)照??１．?Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ?ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ?Ｒ－４?ｍｅｄｉｕｍ；?２．?Ｐｅｐｓｉｎ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ；?３．?Ｔｒｙｐｓｉｎ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ；?４．??Ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ??２．３．５?Ｒ－４培養(yǎng)液中細(xì)菌素對(duì)酸堿穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果??將／Ｗ／ｋｏｅｃｗｓ?Ｒ－４培養(yǎng)液調(diào)至不同ｐＨ值處理，試驗(yàn)結(jié)果如圖７??所示�？梢钥闯�，此細(xì)菌素在ｐＨ值從２？６的范圍內(nèi)對(duì)指示菌有抑制作用，表??明細(xì)菌素在此范圍內(nèi)具有較為穩(wěn)定的酸堿穩(wěn)定性。??４；＊－?２－．??圖７細(xì)菌素酸堿穩(wěn)定性試驗(yàn)??Ｆｉｇ．７?Ｂａｃｔｅｒｉｏｃｉｎ?ａｃｉｄ－ｂａｓｅ?ｓｔａｂｉｌｉｔｙ?ｔｅｓｔ??ｌ．ｐＨ４培養(yǎng)液；２．ｐＨ６培養(yǎng)液；３．ｐＨ８培養(yǎng)液；４．ｐＨ１０培養(yǎng)液；５．ｐＨ１２培養(yǎng)液；??６．?ｐＨ２培養(yǎng)液??１．?ｐＨ４?ｍｅｄｉｕｍ；?２．?ｐＨ６?ｍｅｄｉｕｍ；?３．?ｐＨ８?ｍｅｄｉｕｍ；?４．?ｐＨ?１０?ｍｅｄｉｕｍ；?５．?ｐＨ?１２?ｍｅｄｉｕｍ；??６．?ｐＨ２?ｍｅｄｉｕｍ??

?內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文?２５??圖６酶敏感性試驗(yàn)結(jié)果圖??Ｆｉｇ．６?Ｅｎｚｙｍｅ?ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ?ｔｅｓｔ?ｒｅｓｕｌｔ?ｇｒａｔｈ??ｌ．Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ?ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ?Ｒ－４培養(yǎng)液；２．胃蛋白酶處理；３．胰蛋白酶處理；４．對(duì)照??１．?Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ?ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ?Ｒ－４?ｍｅｄｉｕｍ；?２．?Ｐｅｐｓｉｎ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ；?３．?Ｔｒｙｐｓｉｎ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ；?４．??Ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ??２．３．５?Ｒ－４培養(yǎng)液中細(xì)菌素對(duì)酸堿穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果??將／Ｗ／ｋｏｅｃｗｓ?Ｒ－４培養(yǎng)液調(diào)至不同ｐＨ值處理，試驗(yàn)結(jié)果如圖７??所示。可以看出，此細(xì)菌素在ｐＨ值從２？６的范圍內(nèi)對(duì)指示菌有抑制作用，表??明細(xì)菌素在此范圍內(nèi)具有較為穩(wěn)定的酸堿穩(wěn)定性。??４；＊－?２－．??圖７細(xì)菌素酸堿穩(wěn)定性試驗(yàn)??Ｆｉｇ．７?Ｂａｃｔｅｒｉｏｃｉｎ?ａｃｉｄ－ｂａｓｅ?ｓｔａｂｉｌｉｔｙ?ｔｅｓｔ??ｌ．ｐＨ４培養(yǎng)液；２．ｐＨ６培養(yǎng)液；３．ｐＨ８培養(yǎng)液；４．ｐＨ１０培養(yǎng)液；５．ｐＨ１２培養(yǎng)液；??６．?ｐＨ２培養(yǎng)液??１．?ｐＨ４?ｍｅｄｉｕｍ；?２．?ｐＨ６?ｍｅｄｉｕｍ；?３．?ｐＨ８?ｍｅｄｉｕｍ；?４．?ｐＨ?１０?ｍｅｄｉｕｍ；?５．?ｐＨ?１２?ｍｅｄｉｕｍ；??６．?ｐＨ２?ｍｅｄｉｕｍ??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3345993