轉(zhuǎn)基因禽類(lèi)具有廣泛應(yīng)用前景，比如可以作為醫(yī)用動(dòng)物模型和生物反應(yīng)器。目前，制備轉(zhuǎn)基因家禽的方法有電轉(zhuǎn)染法、反轉(zhuǎn)錄病毒法和脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法。經(jīng)過(guò)分析各方法優(yōu)缺點(diǎn)，擬采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染胚盤(pán)細(xì)胞的方法探討制備轉(zhuǎn)基因鵪鶉的可行性，初步構(gòu)建轉(zhuǎn)基因鵪鶉的模型，為尋求制備轉(zhuǎn)基因鵪鶉的最佳方法提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和基礎(chǔ)。具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：（1）通過(guò)胚盤(pán)下腔注射的方法將經(jīng)脂質(zhì)體包裹的外源質(zhì)粒pEGFP-C2轉(zhuǎn)染胚盤(pán)細(xì)胞，質(zhì)粒與脂質(zhì)體lipofection-2000的最適包裝比為1:2.5（μg:μL），在此濃度下，進(jìn)行凝膠阻滯電泳質(zhì)粒不會(huì)從脂質(zhì)體中溢出。經(jīng)過(guò)對(duì)胚盤(pán)進(jìn)行甲醛固定操作，觀察到注射的溴酚藍(lán)存在于胚盤(pán)下腔中。（2）將處理后種蛋入孵到第6天，取出胚胎，經(jīng)基因組PCR驗(yàn)證，檢測(cè)到胚胎組織中存在pEGFP-C2質(zhì)粒。說(shuō)明本實(shí)驗(yàn)的注射方法可以將外源DNA注射入X期鵪鶉胚盤(pán)下腔中，并成功轉(zhuǎn)染胚盤(pán)細(xì)胞。（3）對(duì)轉(zhuǎn)基因后代的驗(yàn)證結(jié)果表明1只7日齡G0代鵪鶉的內(nèi)臟組織中檢測(cè)到肌胃和腺胃中有外源基因表達(dá)，測(cè)序結(jié)果與原序列比對(duì)正確；1只成年G0代轉(zhuǎn)基因母鵪鶉的部分內(nèi)臟組織中表達(dá)了綠色熒光蛋白；2只G0代轉(zhuǎn)基因鵪鶉的外表可觀察到綠色熒... 

【文章來(lái)源】：石河子大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū) 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：54 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

pEGFP-C2質(zhì)粒載體PCR鑒定結(jié)果

圖 2 質(zhì) 粒 的 線性 化 - 4 :質(zhì) 粒線 性化 后； 5 ： 質(zhì) 粒 線性 化i g u re 2 Th e li n e a ri z a ti o n o f th e p la s mz e d p la s mi d ;5 : N e ga ti v e c o nt r o l w it h 質(zhì) 粒 均 為線 性 結(jié) 構(gòu)， 5 號(hào)孔 為線 ，最 上面 為 環(huán) 狀 結(jié)構(gòu) 。 從圖 中膠 阻滯 實(shí) 驗(yàn)結(jié) 果 粒 室溫 條 件下 共孵 育 20 分 鐘測(cè) 。每 孔 中質(zhì) 粒 的用 量為 4 微質(zhì) 粒 與 脂質(zhì) 體的 包 裝最 佳 比例 是 糖 間 隙， 其 表 面帶 有 正電 荷， 在， 在 進(jìn)行 電 泳 時(shí) DN A 將 不能 向 脂 質(zhì) 體 用量 過(guò) 少 時(shí)， 就 不能 完全 粒 - 脂質(zhì) 體 凝 膠阻 滯 試 驗(yàn) 來(lái)確 定

圖 3 質(zhì) 粒- 脂 質(zhì) 體 凝膠 阻 滯 結(jié)果 ～ 4 ：包 裝比 依次 為 1 ：2 . 5、 1： 2 、1 ： 1 . 5、 1 e 3 Th e re s u lt s o f ge l b lo c k a mo n g li p o s o me a n d ～ 4 ：P a c k in g is in o rd e r :1 ：2 . 5 、1 ：2 、1 ：1 .從 菌液 中 提取 純化 后 的 未 加入 脂 質(zhì)體 的 從脂 質(zhì) 體 溢 出的 質(zhì) 粒 DN A 逐漸 減少 ， 1 號(hào) 比例 大 小， 在比 例 為 1 : 2. 5 時(shí) ，質(zhì) 粒 不會(huì) 轉(zhuǎn) 染實(shí) 驗(yàn) 。 及優(yōu) 越 性 胞 膜， 是 由 脂 質(zhì)雙 分 子 層組 成 的， 磷 脂 分 一 種 囊狀 物被 稱(chēng) 為 脂 質(zhì)小 體 。陽(yáng) 離子 脂

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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