雞沙門氏菌病由一種或多種血清型沙門氏菌引起雞最常見的一種傳染病,根據(jù)抗原結(jié)構(gòu)主要分為雞白痢、雞傷寒和雞副傷寒,嚴重威脅著養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展。為此,針對該病研制出快速、特異、靈敏高的檢測方法迫在眉睫。本課題主要開展的研究工作如下:目的:（1）了解新疆北疆部分地區(qū)大型種雞場雞沙門氏菌病主要流行血清型和耐藥情況。（2）以雞沙門氏菌特異性靶基因inv A為診斷標記物,基于分子生物學(xué)方法和免疫膠體金技術(shù),建立了雞沙門氏菌套式PCR方法、環(huán)介導(dǎo)等溫擴增聯(lián)合橫向側(cè)流試紙（LAMP-LFD）方法和免疫膠體金試紙條,并對該方法的檢測效果進行評價。方法:（1）采用平板凝集試驗對新疆北疆部分地區(qū)大型種雞場采集的750份臨床樣品進行檢測,并對疑似雞沙門氏菌病的病雞進行細菌的分離鑒定、血清型鑒定和病理剖檢方法。最后,用PCR方法進行確診,并對分離的雞沙門氏菌進行耐藥性檢測。（2）根據(jù)雞沙門氏菌侵襲蛋白invA基因,設(shè)計兩對特異性引物,分別作為外引物和內(nèi)引物;以第一輪PCR的產(chǎn)物作為第二輪PCR反應(yīng)的模板,建立雞沙門氏菌病套式PCR方法,同時進行了特異性、敏感性及臨床樣本檢測試驗。（3）依據(jù)雞沙門氏菌侵襲蛋白invA高... 

【文章來源】：石河子大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

臨床標本中分離和鑒定沙門氏菌病一些血清型的程序Fig.1Theprocedureforseparatingandidentifyingsomeserotypesofsalmonellosisinclinicalspecimens2.2分子生物學(xué)方法

板進行 PCR 反應(yīng)。PCR 反應(yīng)體系 20 μL：模板 1.5 μL，2 × ES Taq Master Mix 10 μL下游引物各 0.3 μL，ddH2O 補至 20 μL。PCR 反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性 5 min；95℃ 40 s，59℃退火 30 s, 72℃延伸 1 min 50 s，30 個循環(huán)；72 ℃終延伸 10 min。PC進行 1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測。 藥敏試驗根據(jù) CLSI（2016）[68]進行操作，將分離到的雞沙門氏菌純化培養(yǎng)后，接種到 200 m-肉湯培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng) 24 h 后，按照 CLSI 推薦的肉湯稀釋法進行，并用大腸菌標準菌株（ATCC 25922）作為質(zhì)控菌[69]，進行藥敏試驗。取稀釋好的菌液 500 μ到 20 cm 的營養(yǎng)瓊脂平板上，均勻涂布平板。選取 24 種常用抗生素藥敏片，無菌下，貼于平板中央，于 37℃培養(yǎng) 14～17 h 后按照藥敏片的說明書判定抑菌結(jié)果。結(jié)果平板凝集試驗結(jié)果對 750 份血液樣品進行平板凝集試驗，按照雞沙門氏菌多價染色平板凝集試驗抗原書上的判定要求進行判定，結(jié)果有 69 份呈陽性凝集（圖 1-1），其中大多數(shù)為 100%＋＋＋）凝集和 75%凝集（＋＋＋），少部分出現(xiàn) 50%凝集（＋＋），其感染率為，表明該地區(qū)種雞場感染雞沙門氏菌病相當嚴重。

雞沙門氏菌病檢測方法的建立及初步應(yīng)用半透明的菌落；HE 培養(yǎng)基上為無的圓形菌落，大部分菌落中心呈黑齊的菌落，顏色與培養(yǎng)基顏色相近心略帶黑色、圓整、濕潤和光滑的菌的絮狀物，輕輕搖晃后變?yōu)榘咨林行牡陌胪该骶�。革蘭氏染色鏡，兩端鈍圓，大小為 0.8～1.6 μm×

【參考文獻】：
期刊論文
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[6]沙門氏菌膠體金免疫層析試紙條的研制與應(yīng)用[J]. 彭喆,王莉莉,朱曉琳,時建立,韓紅,劉暢,徐勝男,張玲玲,李俊,黃保華.  家畜生態(tài)學(xué)報. 2016(12)
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[10]淺析雞白痢病的診斷及防治方法[J]. 劉洪濤.  中獸醫(yī)學(xué)雜志. 2015(08)

博士論文
[1]沙門氏菌及其致病性血清型分子檢測技術(shù)研究及在食品中的應(yīng)用[D]. 翟立公.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015

碩士論文
[1]檢測牛奶中布魯氏菌套式PCR試劑盒研制[D]. 欒云艷.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué) 2016
[2]湖北省雞源沙門氏菌的分離鑒定和耐藥性分析[D]. 方翟.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[3]布魯氏菌病與萊姆病膠體金免疫層析試紙條的研制[D]. 程婷婷.石河子大學(xué) 2014
[4]華東地區(qū)雞白痢沙門氏菌的分離鑒定、分子流行病學(xué)及致病性研究[D]. 查華.揚州大學(xué) 2013
[5]沙門氏菌富集及ELISA檢測方法的研究[D]. 牛瑞江.南昌大學(xué) 2012
[6]廣西豬源沙門氏菌的分離鑒定及其生物學(xué)特性的研究[D]. 黃福標.廣西大學(xué) 2012
[7]雞傷寒沙門氏菌的分離鑒定及藥物敏感性試驗[D]. 劉素英.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2011
[8]雞白痢沙門氏菌的分離鑒定及微量平板凝集抗原的制備[D]. 張永第.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2010
[9]肉品中腸毒素性大腸桿菌和腸沙門氏菌快速檢測方法的建立[D]. 孫紅麗.山西農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005
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本文編號：3342619