發(fā)布時(shí)間：2021-08-13 23:27

　　隨著集約化畜禽養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展,畜禽養(yǎng)殖糞便的產(chǎn)生量也隨之增加。畜禽糞便的不合理處理與處置對(duì)水、空氣和土壤均會(huì)造成一定程度的污染,尤其是畜禽糞便中的致病微生物可能會(huì)造成人畜共患病的傳播,不僅阻礙畜禽養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展,而且危害人們的健康,甚至引起公共衛(wèi)生事故。因此,掌握畜禽養(yǎng)殖糞便中典型微生物的污染現(xiàn)狀及規(guī)律,并建立一套可操作性強(qiáng)、結(jié)果判定方便的現(xiàn)場(chǎng)快速一體化檢測(cè)方法是非常有必要的。本研究根據(jù)畜禽養(yǎng)殖場(chǎng)現(xiàn)場(chǎng)條件的特點(diǎn),借助載正電荷材料對(duì)細(xì)菌高效富集和環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（LAMP）技術(shù)快速檢測(cè)的特性,建立起增菌-富集-LAMP檢測(cè)一體化的糞便中常見(jiàn)致病菌現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)體系,同時(shí)利用固定酶底物法和PCR技術(shù)對(duì)天津市3個(gè)畜禽種類的9家養(yǎng)殖場(chǎng)糞便中的指示微生物（總大腸菌群、糞大腸菌群、大腸埃希氏菌）和致病微生物（沙門(mén)氏菌）進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查。主要研究結(jié)果如下:（1）畜禽糞便種類不同,其指示微生物的數(shù)量存在顯著差異,未經(jīng)無(wú)害化處理的豬糞、雞糞、牛糞中指示微生物數(shù)量范圍分別為10⁷～10⁹ MPN·g^-1、10⁶～10

【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：69 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

目的序列上6個(gè)特異區(qū)域及引物設(shè)計(jì)

中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文第一章緒論5合酶的作用下由3’端向5’端進(jìn)行配對(duì)延伸，形成與模板互補(bǔ)的新鏈，如圖1-2（李陽(yáng)，2018）。圖1-2LAMP擴(kuò)增第一步Fig.1-2ThefirststepofLAMP第二步：外引物F3與模板DNA鏈外側(cè)的F3c區(qū)域堿基互補(bǔ)結(jié)合，在BstDNA聚合酶的作用下以F3引物的3’端為起點(diǎn)繼續(xù)向下配對(duì)延伸，合成新的DNA鏈，與此同時(shí)在第一步以FIP引物合成的DNA互補(bǔ)單鏈被置換下來(lái)，如圖1-3（李陽(yáng)，2018）。圖1-3LAMP擴(kuò)增第二步Fig.1-3ThesecondstepofLAMP第三步：在第二步中被新合成的DNA鏈置換下來(lái)的單鏈DNA的5’端由F1c、F2、F1三段組成，在單鏈狀態(tài)下，F(xiàn)1c區(qū)段和F1區(qū)段會(huì)進(jìn)行自我堿基配對(duì)由此形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)。與此同時(shí)，內(nèi)引物BIP的B2區(qū)段與B2c區(qū)段結(jié)合，以B2的3’端為起點(diǎn)開(kāi)始合成單鏈的互補(bǔ)鏈，在合成的過(guò)程中環(huán)狀結(jié)構(gòu)被打開(kāi)；隨后，外引物B3與DNA模板鏈上的B3c區(qū)域堿基互補(bǔ)并繼續(xù)向下延伸形成新的雙鏈，同時(shí)置換出BIP合成的DNA單鏈，該鏈的兩端均發(fā)生自我堿基配對(duì)，形成啞鈴狀鏈結(jié)構(gòu)，如圖1-4（李陽(yáng)，2018）。

中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文第一章緒論5合酶的作用下由3’端向5’端進(jìn)行配對(duì)延伸，形成與模板互補(bǔ)的新鏈，如圖1-2（李陽(yáng)，2018）。圖1-2LAMP擴(kuò)增第一步Fig.1-2ThefirststepofLAMP第二步：外引物F3與模板DNA鏈外側(cè)的F3c區(qū)域堿基互補(bǔ)結(jié)合，在BstDNA聚合酶的作用下以F3引物的3’端為起點(diǎn)繼續(xù)向下配對(duì)延伸，合成新的DNA鏈，與此同時(shí)在第一步以FIP引物合成的DNA互補(bǔ)單鏈被置換下來(lái)，如圖1-3（李陽(yáng)，2018）。圖1-3LAMP擴(kuò)增第二步Fig.1-3ThesecondstepofLAMP第三步：在第二步中被新合成的DNA鏈置換下來(lái)的單鏈DNA的5’端由F1c、F2、F1三段組成，在單鏈狀態(tài)下，F(xiàn)1c區(qū)段和F1區(qū)段會(huì)進(jìn)行自我堿基配對(duì)由此形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)。與此同時(shí)，內(nèi)引物BIP的B2區(qū)段與B2c區(qū)段結(jié)合，以B2的3’端為起點(diǎn)開(kāi)始合成單鏈的互補(bǔ)鏈，在合成的過(guò)程中環(huán)狀結(jié)構(gòu)被打開(kāi)；隨后，外引物B3與DNA模板鏈上的B3c區(qū)域堿基互補(bǔ)并繼續(xù)向下延伸形成新的雙鏈，同時(shí)置換出BIP合成的DNA單鏈，該鏈的兩端均發(fā)生自我堿基配對(duì)，形成啞鈴狀鏈結(jié)構(gòu)，如圖1-4（李陽(yáng)，2018）。


本文編號(hào)：3341325