BTG2是新型細(xì)胞抗增殖因子BTG/TOB基因家族成員之一,它是由神經(jīng)生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)表達(dá)產(chǎn)生的一種分泌蛋白,屬于瞬時(shí)早期反應(yīng)基因。BTG2在豬和牛中均存在品種和個(gè)體表達(dá)差異。本研究選擇蒙古牛和水牛BTG2啟動(dòng)子區(qū)進(jìn)行研究,以闡明蒙古牛和水牛BTG2差異表達(dá)分子機(jī)理,獲得如下結(jié)果：以蒙古牛和水牛基因組DNA為模板,分別克隆獲得蒙古牛和水牛1708bp、1478bp的BTG2啟動(dòng)子序列。序列比對(duì)結(jié)果顯示,相對(duì)于蒙古牛,水牛BTG2啟動(dòng)子存在269bp的缺失,生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn),該序列存在多個(gè)轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn),這為后續(xù)多態(tài)性分析和功能鑒定奠定了基礎(chǔ)。將蒙古牛和水牛BTG2啟動(dòng)子序列分別重組到哺乳動(dòng)物表達(dá)載體pEGFP-N1中,獲得瞬時(shí)表達(dá)載體pBTG2（p）-EGFP,并將它們分別導(dǎo)入HeLa細(xì)胞,神經(jīng)生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)后,均檢測(cè)到報(bào)道基因GFP表達(dá),且蒙古牛BTG2啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性高于水牛,由此推測(cè),水牛BTG2啟動(dòng)子區(qū)缺失的269bp片段很可能是導(dǎo)致該現(xiàn)象的根本原因。利用qRT-PCR檢測(cè)BTG2在水牛、蒙古牛肌肉組織中的實(shí)時(shí)表達(dá)狀況,由此揭示BTG2啟動(dòng)子區(qū)269bp缺失是否影響其轉(zhuǎn)錄。研究結(jié)果... 

【文章來(lái)源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁(yè)數(shù)】：60 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

BTG/TOB家族蛋白序列示意圖

圖2 BTG2代謝網(wǎng)絡(luò)Fig 2 The metabolism network of BTG2啟動(dòng)子研究進(jìn)展. 1啟動(dòng)子概述啟動(dòng)子（Promoter)是與基因表達(dá)啟動(dòng)相關(guān)的順式作用元件，是結(jié)構(gòu)基因的成部分。它是一段具有獨(dú)立功能的DNA序列，位于轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)5 ‘端上游區(qū)具有活化RNA聚合酶的作用，使之與模板DNA準(zhǔn)確地相結(jié)合，且具有轉(zhuǎn)錄特異性【3”。啟動(dòng)子具有以下四個(gè)顯著特征：首先它具有序列特異性。通常幾和結(jié)構(gòu)都相對(duì)保守的序列框位于啟動(dòng)子中，啟動(dòng)子的功能會(huì)因序列框中堿基而影響。其次它具有嚴(yán)格的方向性。啟動(dòng)子作為一種具有有方向性的順式調(diào)控，即在正、反兩個(gè)方向中只能有一個(gè)具有啟動(dòng)子的功能，因此如果改變了它的就會(huì)使它失去啟動(dòng)的能力。位置特異性是啟動(dòng)子的特點(diǎn)之一。大多數(shù)啟動(dòng)子位調(diào)控基因的上游區(qū)，也有一些啟動(dòng)子位于基因編碼區(qū)的前端，如果啟動(dòng)子離開(kāi)

蒙古牛和水牛啟動(dòng)子的克隆及功能分析點(diǎn)都制約著電轉(zhuǎn)染法的應(yīng)用與推廣””。楊東山等將帶有綠色焚光霉素抗性基因的人胰島素乳腺特異表達(dá)載體通過(guò)電轉(zhuǎn)染法將其轉(zhuǎn)染到胎兒成纖維細(xì)胞中，從而獲得了核供體轉(zhuǎn)基因細(xì)胞，該細(xì)胞可用于轉(zhuǎn)研究。馬曉霞等^=同樣釆用電轉(zhuǎn)染法將體外合成的融合基因的染至K562細(xì)胞株中，其轉(zhuǎn)染效率可達(dá)到70%。Satoshi 胎兒成纖維細(xì)胞進(jìn)行了電轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)，從而獲得了轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系，為轉(zhuǎn)研究及產(chǎn)生奠定了基礎(chǔ)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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