隨著我國奶牛業(yè)的快速發(fā)展,奶牛酮病發(fā)病率不斷升高,對奶牛的健康和生產(chǎn)性能產(chǎn)生嚴(yán)重的影響。圍產(chǎn)期的奶牛,尤其是高產(chǎn)奶牛,因胎兒生長和泌乳對能量的需求增加,干物質(zhì)攝入量降低,致使能量攝入不能滿足能量需求而出現(xiàn)能量負(fù)平衡,為了彌補(bǔ)能量赤字,機(jī)體動員體脂,過度的脂肪動員就會導(dǎo)致酮病的發(fā)生。反芻動物因瘤胃代謝特點(diǎn)幾乎不能從瘤胃中直接攝取葡萄糖,機(jī)體所需的葡萄糖有90%是通過糖異生獲得,而甘油作為重要的生糖物質(zhì),與糖代謝關(guān)系十分密切,可有效解決反芻動物因糖供應(yīng)不足而發(fā)生的能量代謝問題。發(fā)酵法生產(chǎn)甘油,具有清潔安全等特點(diǎn),因而受到廣泛的關(guān)注。產(chǎn)甘油釀酒酵母NAU-ZH-GY1是擁有本實(shí)驗自主知識產(chǎn)權(quán),同時釀酒酵母菌也是農(nóng)業(yè)部公布的允許作為飼用的益生菌,對其進(jìn)行基因改造,提高甘油產(chǎn)量,將其發(fā)酵液制成飼料添加劑,發(fā)揮益生菌和甘油生糖的雙重功效。本課題組已成功地敲除了釀酒酵母NDE1基因,以釀酒酵母代謝原理為基礎(chǔ),以缺失NDE1基因的釀酒酵母菌NAU-ZH-GY1-nde1△為出發(fā)菌株,超表達(dá)GPD1基因,3-磷酸甘油脫氫酶（Gpd1蛋白）的含量增加,催化磷酸二羥丙酮加氫還原3-磷酸甘油,明顯提高甘油生成... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖４．１質(zhì)粒ｐＳＨ６５??Ｆｉｇｕｒｅ?４．１?ｐｌａｓｍｉｄ?ｐＵＧ６??

２．３．２測序??電泳鑒定之后，用Ｔａｋａｍ的膠回收試劑念進(jìn)行膠回收，送Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司測??序，測序結(jié)果如圖４．８所示。用ＤＮＡＭＡＮ軟件進(jìn)行分析，堿基相同。??１?公領(lǐng)，ＣＣ。廣Ｃ廣ＡＡ辨＆?？眶。占Ｔ廠加Ｃ廠Ｃ群廠瓦凸田??４１?ＡＣＣＴＴＣＴＣＡＡ?ＧＣＡＡＧＧＴＴＴＴ?ＣＡＧＴＡＴＡＡＴＧ?ＴＴＡＣＡＴＧＣＧＴ??８１?ＡＣＡＣＧＣＧＴＣＴ?ＧＴＡＣＡＧＡＡＡＡ?ＡＡＡＡＧＡＡＡＡＡ?ＴＴＴＧＡＡＡＴＡＴ??１２１?ＡＡＡＴＡＡＣＧ了了?Ｃ了了ＡＡ了ＡＣ了Ａ?ＡＣＡＴＡＡＣ了ＡＴ?ＡＡＡＡＡＡＡＴＡＡ??１６１?ＡＴＡＧＧＧＡＣＣＴ?ＡＧＡＣＴＴＣＡＧＧ?ＴＴＧＴＣＴＡＡＣＴ?ＣＣＴＴＣＣＴＴＴＴ??２０１?ＣＧＧＴＴＡＧＡＧＣ?ＧＧＡＴＧＴＧＧＧＧ?ＧＧＡＧＧＧＣＧＴＧ?ＡＡＴＧＴＡＡＧＣＧ??２４１?ＴＧＡＣＡＴＡＡＣＴ?ＡＡＴＴＡＣＡＴＧＡ?ＣＣＣＧＣＧＧＧＡＡ?Ａ??圖４－８?ＰＣ民擴(kuò)增ＣＹＣｒ測序結(jié)果??Ｆｉｇ．?４－８?Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ?ｏｆ?ＣＹＣｌ??陰影部分是上游引物：劃線部分，從上到下分別是Ｓｐｅｌ，ＳａｃＩＩ酶切位點(diǎn)??２．４載體ＰＧＣ的構(gòu)建??２．４．１?ＴＰＧ載體的構(gòu)建??限制性內(nèi)切酶餅抗餅／ｃＡ仇＂戶／酶切１ＴＧ，結(jié)果如圖４．９所??示：??Ｍ?１??誦＝ｚ??閣４．９載體ＴＰＧ酶切??Ｆｉｇ．４．９?Ｄｉｇｅｓｔｉｏ打?ｏｆ?ｖｅｄｏｒ?ＴＰＧ??Ｍ：?Ｍａｋｅｒ?３?；?１．?ＴＰＧ載體的酶切鑒定??３６??

圖４－１０?ＰＰＧ的酶切鑒定??Ｆｉｇ．?４－１０?Ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ?ｏｆ?ｐｌａｓｍｉｄ?ＰＰＧ?ｂｙ?ＥｃｏＲＶ?ａｎｄ?Ｓｐｅｌ??Ｍ：?Ｍａｋｅｒ?３１．ＰＰＧ鑒小為４００９?ｂ和２２００?ｂ

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]分光光度法測定高濃度培養(yǎng)液下的產(chǎn)油酵母菌生長曲線[J]. 馬勇,圖雅,陳秀莉,門中華.  北方園藝. 2013(08)
[2]奶牛酮病的發(fā)病機(jī)理研究概述[J]. 李寧,程喜榮.  中國牛業(yè)科學(xué). 2013(01)
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[5]不同酶切體系對膠回收純化DNA濃度的影響[J]. 徐珍,張玉芹,聶永莉.  醫(yī)學(xué)研究雜志. 2010(09)
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[9]高碘酸氧化法測定甘油含量影響因素研究[J]. 侯麗偉,易玉峰,丁福臣.  糧食與油脂. 2010(01)
[10]甘油生產(chǎn)方法研究進(jìn)展[J]. 樊利民,王菊華,裴文.  浙江化工. 2009(06)

博士論文
[1]奶牛能量代謝障礙性疾病微生態(tài)制劑的研制及其效果評價[D]. 孫國權(quán).吉林大學(xué) 2010



本文編號：3336616