GHR基因編輯豬生長(zhǎng)發(fā)育指標(biāo)及相關(guān)基因表達(dá)研究
發(fā)布時(shí)間：2021-08-09 23:51
生長(zhǎng)激素（growth hormone,GH）對(duì)于動(dòng)物發(fā)育生長(zhǎng)、生殖泌乳以及免疫功能等發(fā)揮著非常重要的作用,但它必須與靶器官上的生長(zhǎng)激素受體（Growth hormone receptor,GHR）結(jié)合后再由介導(dǎo)將信號(hào)傳入細(xì)胞內(nèi)才能發(fā)揮作用。GHR是一種單鏈跨膜蛋白,由620個(gè)氨基酸組成,是受體超家族成員之一。GH主要通過結(jié)合生長(zhǎng)激素受體GHR激活下游JAK-STAT,PKC及IRS等信號(hào)通路,參與調(diào)節(jié)動(dòng)物體內(nèi)包括生長(zhǎng)發(fā)育、代謝、繁殖等眾多生理和病理過程。JAK2和STAT3是JAK/STAT信號(hào)通路調(diào)控中的重要基因,在動(dòng)物生長(zhǎng)和細(xì)胞增值等方面具有重要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的生物學(xué)功能。本研究選擇貴州大學(xué)香豬育種場(chǎng)選育的F2代GHR基因編輯豬作為試驗(yàn)對(duì)象,通過F2代雜交,擴(kuò)繁得到F3代;采集F3代仔豬耳組織,提取DNA,PCR擴(kuò)增,產(chǎn)物測(cè)序,序列對(duì)比和圖譜分析的方法,篩選出F3代GHR基因編輯陽(yáng)性豬和陰性豬,并測(cè)定其1-6月齡體重、體長(zhǎng)、體高、胸圍等生長(zhǎng)指標(biāo)。利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法對(duì)GHR、JAK2和STAT3基因在貴州從江香豬和F2代GHR基因編輯豬心臟、肝臟、肺臟、腎臟和背最肌肉等組織的...
【文章來(lái)源】：貴州大學(xué)貴州省 211工程院校
【文章頁(yè)數(shù)】：72 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
KEGG中JAK-STAT信號(hào)通路Fig.1.1JAK-STATsignalingpathwayinKEGG
生長(zhǎng)激素 GH 與細(xì)胞膜上的生長(zhǎng)激素受 GHR 結(jié)合，激活細(xì)胞質(zhì)酪氨酸激酶 J磷酸化和磷酸化，然后與JAK2和GHR協(xié)同作用，將激活信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活子STAT3 轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核，并與調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子的特異序列結(jié)合，激活下游的基因它的轉(zhuǎn)錄，它調(diào)節(jié)許多生物過程，如細(xì)胞增殖，分化，細(xì)胞凋亡和免疫調(diào)節(jié)。，趙聲明等人試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)通過 JAK2 基因介導(dǎo)，可以長(zhǎng)期擴(kuò)增調(diào)控轉(zhuǎn)基因骨髓胞。2006 年，F(xiàn)renzel 等人通過研究發(fā)現(xiàn)抑制老鼠胚胎中的 JAK2 基因會(huì)導(dǎo)致老鼠死08 年，Schindler 等人研究結(jié)果表明，活化的 STAT3 可以促進(jìn) B 淋巴細(xì)胞-2 和生因表達(dá)，使凋亡蛋白酶-3 活性降低，進(jìn)而抑制細(xì)胞凋亡。Marodi 等（2001 年)研，不僅增加了 STAT3 在腫瘤組織中的表達(dá)，又阻斷 STAT3 的磷酸化，所以可見GF 蛋白的表達(dá)，進(jìn)而導(dǎo)致下游靶基因的過度表達(dá)，并發(fā)揮抗凋亡作用，而抑制胞凋亡。JAK2 和 STAT3 是 JAK/STAT 信號(hào)通路調(diào)控中的重要基因，在動(dòng)物生長(zhǎng)和細(xì)胞方面具有重要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的生物學(xué)功能（常建梅，2015）。
用 Sanger 測(cè)序法對(duì)雜合子豬的 PCR 產(chǎn)物進(jìn)行鑒定，經(jīng)序列和基因譜對(duì)位點(diǎn)處開始為雙峰的個(gè)體是雜合子（GHR+/-），出現(xiàn)單一圖譜的個(gè)體為野生型變純合子香豬，但突變純合子香豬比野生型香豬多 4 個(gè) TGGA 堿基或 2 個(gè) TG Cui,2015）。豬在人類疾病動(dòng)物模型、新藥安全性有效性評(píng)價(jià)、異種器官移植供體等領(lǐng)出獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，而小型豬由于其體型較小，具有易于實(shí)驗(yàn)操作、易于微生物控制本低等優(yōu)點(diǎn)，逐漸成為生命科學(xué)研究中的重要實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(商海濤, 2007)。因此，用小型豬將成為必不可少的過程。本課題組前期以貴州大學(xué)香豬育種場(chǎng)培育的香豬為母本，中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)提供的 GHR 基因編輯豬(GHR(+/-))為父本雜交選育篩選出 F1 代陽(yáng)性豬和陰性豬，再用 F1 代進(jìn)行擴(kuò)繁得到 F2 代（陳明飛 2015，陳為實(shí)驗(yàn)用香豬 GHR 基因編輯豬配種和培育提供參考數(shù)據(jù)，以滿足生物醫(yī)學(xué)研量實(shí)驗(yàn)用小型豬的需求。
本文編號(hào)：3333024
【文章來(lái)源】：貴州大學(xué)貴州省 211工程院校
【文章頁(yè)數(shù)】：72 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
KEGG中JAK-STAT信號(hào)通路Fig.1.1JAK-STATsignalingpathwayinKEGG
生長(zhǎng)激素 GH 與細(xì)胞膜上的生長(zhǎng)激素受 GHR 結(jié)合，激活細(xì)胞質(zhì)酪氨酸激酶 J磷酸化和磷酸化，然后與JAK2和GHR協(xié)同作用，將激活信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活子STAT3 轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核，并與調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子的特異序列結(jié)合，激活下游的基因它的轉(zhuǎn)錄，它調(diào)節(jié)許多生物過程，如細(xì)胞增殖，分化，細(xì)胞凋亡和免疫調(diào)節(jié)。，趙聲明等人試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)通過 JAK2 基因介導(dǎo)，可以長(zhǎng)期擴(kuò)增調(diào)控轉(zhuǎn)基因骨髓胞。2006 年，F(xiàn)renzel 等人通過研究發(fā)現(xiàn)抑制老鼠胚胎中的 JAK2 基因會(huì)導(dǎo)致老鼠死08 年，Schindler 等人研究結(jié)果表明，活化的 STAT3 可以促進(jìn) B 淋巴細(xì)胞-2 和生因表達(dá)，使凋亡蛋白酶-3 活性降低，進(jìn)而抑制細(xì)胞凋亡。Marodi 等（2001 年)研，不僅增加了 STAT3 在腫瘤組織中的表達(dá)，又阻斷 STAT3 的磷酸化，所以可見GF 蛋白的表達(dá)，進(jìn)而導(dǎo)致下游靶基因的過度表達(dá)，并發(fā)揮抗凋亡作用，而抑制胞凋亡。JAK2 和 STAT3 是 JAK/STAT 信號(hào)通路調(diào)控中的重要基因，在動(dòng)物生長(zhǎng)和細(xì)胞方面具有重要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的生物學(xué)功能（常建梅，2015）。
用 Sanger 測(cè)序法對(duì)雜合子豬的 PCR 產(chǎn)物進(jìn)行鑒定，經(jīng)序列和基因譜對(duì)位點(diǎn)處開始為雙峰的個(gè)體是雜合子（GHR+/-），出現(xiàn)單一圖譜的個(gè)體為野生型變純合子香豬，但突變純合子香豬比野生型香豬多 4 個(gè) TGGA 堿基或 2 個(gè) TG Cui,2015）。豬在人類疾病動(dòng)物模型、新藥安全性有效性評(píng)價(jià)、異種器官移植供體等領(lǐng)出獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，而小型豬由于其體型較小，具有易于實(shí)驗(yàn)操作、易于微生物控制本低等優(yōu)點(diǎn)，逐漸成為生命科學(xué)研究中的重要實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(商海濤, 2007)。因此，用小型豬將成為必不可少的過程。本課題組前期以貴州大學(xué)香豬育種場(chǎng)培育的香豬為母本，中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)提供的 GHR 基因編輯豬(GHR(+/-))為父本雜交選育篩選出 F1 代陽(yáng)性豬和陰性豬，再用 F1 代進(jìn)行擴(kuò)繁得到 F2 代（陳明飛 2015，陳為實(shí)驗(yàn)用香豬 GHR 基因編輯豬配種和培育提供參考數(shù)據(jù)，以滿足生物醫(yī)學(xué)研量實(shí)驗(yàn)用小型豬的需求。
本文編號(hào)：3333024
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