日本血吸蟲病是由日本血吸蟲感染引起的人獸共患寄生蟲病,吡喹酮是目前唯一大規(guī)模使用的血吸蟲病治療藥物,但該藥主要對成蟲有效且不能解決重復感染的難題,因而研制出有效、安全的疫苗成為血吸蟲病防治的重要科技需求。血吸蟲疫苗研究取得突破要以血吸蟲感染免疫機制為基礎。本實驗室前期研究表明,miR181a可能在宿主抗日本血吸蟲感染的早期免疫應答中發(fā)揮了重要作用,本文以實驗動物和巨噬細胞作為研究對象,從體內外對miR181a在抗日本血吸蟲感染中的調節(jié)作用作了初步的探討。鑒于巨噬細胞在宿主抗血吸蟲感染過程中和血吸蟲病發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮了作用,本文首先以RAW264.7巨噬細胞作為研究對象,探討miR181a在血吸蟲童蟲抗原SSA刺激巨噬細胞中的免疫調節(jié)作用。用日本血吸蟲童蟲抗原SSA和miR181a模擬物分別或共同刺激/轉染RAW264.7巨噬細胞,再用實時定量PCR技術或流式細胞術分析細胞miR181a和TNF-α等細胞因子及M1型和M2型巨噬細胞標記分子的表達變化。結果顯示日本血吸蟲童蟲抗原SSA刺激RAW264.7巨噬細胞后,miR-181a及IL-1β、IL-4、TNF-α、IL-10、IL-6等促... 

【文章來源】：上海師范大學上海市

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【學位級別】：碩士

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圖1.1日本血吸蟲成蟲（雌雄合抱）

2.1.2.6 統(tǒng)計學分析每個實驗都進行 3 次重復。實驗數(shù)據(jù)利用 SPSS22.0 軟件進組資料的比較采用兩獨立樣本的 t 實驗，多組資料的比較采（One-Way AVOVA）和 LSD-t 檢驗；p<0.05 為顯著差異，p<0作圖軟件為 Graphpad Prism7.01。2.2 結果2.2.1 SSA 刺激 RAW264.7 巨噬細胞后 miR-181a 的表與 PBS 對照組相比，不同濃度的童蟲抗原刺激 RAmicroRNA-181a 都呈上調表達（ p<0.01 ）（如圖 1 ），（0.1ug-1ug/ml）刺激細胞的表達水平明顯高于 2ug 及以上濃表達水平。

第 2 章 MiR181a 對日本血吸蟲童蟲抗原刺激巨噬細胞的免疫應答起負調節(jié)作用 上海師范大學碩士學位論和未轉染的PBS對照組細胞相比，轉染miR-181a模擬物后，IL-1β 、TNF- 、IL三種細胞因子的表達量都有所下降，IL-10 下調表達不明顯。而轉染 miR-18抑制劑的細胞這三種細胞因子的表達量都明顯上升。而在 miR-181a 模擬物和制劑處理的細胞中，IL-4 的表達水平都有所上升，其中模擬物處理的細胞上水平明顯高于抑制劑處理細胞。無關對照 microRNA 轉染細胞各種細胞因子的達水平大多介于 PBS 對照組和模擬物或抑制劑處理細胞組之間（如圖 2）。以結果說明 miR-181a 在 RAW264.7 細胞中對 T h 1 型細胞因子等的表達可能起負節(jié)作用。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]日本血吸蟲感染小鼠肝臟枯否細胞差異表達MicroRNA及基因的分析[J]. 白瑞璞,潘衛(wèi)慶.  中國熱帶醫(yī)學. 2017(04)
[2]小鼠抗日本血吸蟲感染的脾早期細胞免疫應答的初步研究[J]. 張祖航,韓宏曉,曹曉丹,沈元曦,韓倩,洪煬,傅志強,林矯矯.  中國獸醫(yī)科學. 2017(02)
[3]重視羊血吸蟲病防治 推進我國消除血吸蟲病進程[J]. 林矯矯.  中國血吸蟲病防治雜志. 2016(05)
[4]大、小鼠來源32d日本血吸蟲凋亡相關基因表達分析[J]. 王濤,洪煬,傅志強,曹曉丹,呂超,竇雪峰,許瑞,韓倩,賈秉光,趙枝新,林矯矯.  中國動物傳染病學報. 2016(03)
[5]2014年全國血吸蟲病疫情通報[J]. 雷正龍,張利娟,徐志敏,黨輝,許靜,呂山,曹淳力,李石柱,周曉農.  中國血吸蟲病防治雜志. 2015(06)
[6]microRNA調控巨噬細胞極化的研究進展[J]. 畢佳,曾憲鑫,魏敏杰,趙琳.  細胞與分子免疫學雜志. 2015(11)
[7]中國家畜血吸蟲病防治[J]. 林矯矯,胡述光,劉金明.  中國動物傳染病學報. 2011(03)
[8]日本血吸蟲SjPRMT1基因的克隆、表達及表達產物的免疫保護效果分析[J]. 韓宏曉,彭金彪,洪煬,王欣之,石耀軍,傅志強,劉金明,程國鋒,李祥瑞,林矯矯.  中國農業(yè)科學. 2010(04)
[9]實時熒光定量PCR法檢測日本血吸蟲[J]. 周立,梁冰,趙友云,黃露,王業(yè)富.  中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志. 2008(04)
[10]血吸蟲對吡喹酮抗藥性的研究 Ⅺ日本血吸蟲中國大陸現(xiàn)場分離株蟲卵毛蚴尾蚴對吡喹酮的敏感性[J]. 梁幼生,戴建榮,李洪軍,汪偉,陶永輝,張鍵鋒,李偉,朱蔭昌,G.C. Coles,M.J. Doenhoff.  中國血吸蟲病防治雜志. 2007(05)

博士論文
[1]日本血吸蟲排泄分泌蛋白的研究[D]. 曹曉丹.中國農業(yè)科學院 2016
[2]miR-669n/SENP6及Rab5/7對LPS/TLR4信號轉導通路的調控機制研究[D]. 龍宇鵬.第三軍醫(yī)大學 2015
[3]TLR4/miR-181a信號軸在腦缺血再灌注后神經損傷中的作用及機制研究[D]. 宋磊.吉林大學 2014



本文編號：3332820