轉(zhuǎn)基因動(dòng)物研究開始于上個(gè)世紀(jì)七十年代末,是一項(xiàng)能對(duì)家畜基因組進(jìn)行修飾的有效技術(shù),對(duì)改進(jìn)畜牧業(yè)生產(chǎn)效率有重大的作用。目前轉(zhuǎn)基因技術(shù)有原核注射法、精子介導(dǎo)法、逆轉(zhuǎn)錄病毒感染法和體細(xì)胞移植法等。將精子載體轉(zhuǎn)基因法（SMGT）與單精注射（ICSI）結(jié)合制備轉(zhuǎn)基因動(dòng)物是一種新的轉(zhuǎn)基因技術(shù),研究歷史較短,但其可行性和高效性已在多個(gè)物種得到試驗(yàn)證實(shí)。BAC作為轉(zhuǎn)基因載體,可攜帶的基因包括上下游調(diào)控序列,可以和轉(zhuǎn)錄酶、轉(zhuǎn)錄因子等作用,轉(zhuǎn)基因?qū)⒛茏袷鼗蚬逃械谋磉_(dá)機(jī)制。所以將ICSI-SMGT技術(shù)與BAC轉(zhuǎn)基因技術(shù)相結(jié)合制備轉(zhuǎn)基因豬,為我們今后制備大片段轉(zhuǎn)基因豬提供了新方法,具有廣闊的應(yīng)用前景。為成功制備轉(zhuǎn)基因豬胚胎,本課題將從豬卵母細(xì)胞延遲保存與體外培養(yǎng)和以單精注射技術(shù)與BAC載體技術(shù)相結(jié)合為目標(biāo)的兩個(gè)方面進(jìn)行研究。第一方面,建立豬卵母細(xì)胞體外延遲保存體系,擬設(shè)計(jì)先將卵母細(xì)胞分別放入TCM199（含HEPE）、PBS緩沖液（無Ca2+和Mg2+）和DMEM低糖培養(yǎng)基中37℃保存6-8h后轉(zhuǎn)入成熟培養(yǎng)液與瞬時(shí)放入成熟培養(yǎng)液的對(duì)照組作比較,統(tǒng)計(jì)分析試驗(yàn)組之間成熟率,卵裂率和囊胚率的差別。其中對(duì)照組成熟率為... 

【文章來源】：浙江師范大學(xué)浙江省

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

BACDNA的EcoRI和BamHI醉切鑒定電泳圖

3.2 BAC DNA的Not I醉切鲞定電泳圖，酶切后得到大小為9000bp左右和遠(yuǎn)預(yù)期，酶切鑒定BAC質(zhì)粒正確。培養(yǎng)液保存卵母細(xì)胞對(duì)卵母細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)為：卵母細(xì)胞裹有的卵丘細(xì)胞均已實(shí)驗(yàn)，采集有效COCs共3190枚，其枚，得到78.19%的成熟率；TCM199，成熟率為76.25%，p=0.2275(p>0.05)

1 345 2672 330 249對(duì)照組3 355 289平均數(shù) 344 269 71 320 2432 320 237TCM1993 320 252平均數(shù) 320 244 71 200 98,…+ 2 200 95PBS緩沖液3 200 102平均數(shù) 200 98 41 200 95,一—# 2 200 92DMEM低糖培養(yǎng)基3 200 98平均數(shù) 200 95 4

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]牛卵母細(xì)胞及體外胚培養(yǎng)技術(shù)研究[D]. 桑國俊.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008



本文編號(hào)：3331695