對豬APOA2潛在啟動子區(qū)進(jìn)行克隆及活性分析,確定核心啟動子區(qū)域,并進(jìn)一步分析轉(zhuǎn)錄因子GATA1對APOA2基因轉(zhuǎn)錄活性的影響。結(jié)果表明,APOA2基因主要在豬的肝臟及脂肪組織中表達(dá)。雙熒光素酶活性顯示,豬APOA2基因5′端側(cè)翼-813～-565 bp區(qū)域?yàn)楹诵膯幼訁^(qū),且-659～-565 bp區(qū)域內(nèi)更可能存在一些促進(jìn)APOA2轉(zhuǎn)錄的順式作用元件。過表達(dá)GATA1基因結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)錄因子GATA1顯著促進(jìn)APOA2基因的轉(zhuǎn)錄;定點(diǎn)突變試驗(yàn)確認(rèn),轉(zhuǎn)錄因子GATA1可直接與APOA2基因啟動子區(qū)的GATA1結(jié)合位點(diǎn)（-608～-599 bp）相結(jié)合。轉(zhuǎn)錄因子GATA1可直接靶向APOA2基因啟動子區(qū)并促進(jìn)APOA2的轉(zhuǎn)錄。 

【文章來源】：湖北農(nóng)業(yè)科學(xué). 2020,59(22)

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

豬APOA2基因在不同組織中的表達(dá)量

利用PCR技術(shù)從大白豬基因組DNA中擴(kuò)增獲得7個長度逐級缺失的APOA2啟動子片段，并連接至p GL3-Basic雙熒光素報告載體中，構(gòu)建7個啟動子雙熒光素酶報告載體，命名為APOA2-1至APOA2-7。將構(gòu)建的熒光載體質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切鑒定，釋放出的片段與預(yù)期結(jié)果相符（圖2），表明載體構(gòu)建成功。將構(gòu)建成功的7個啟動子載體質(zhì)粒與p GL3-Basic質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染C2C12、3T3-L1及PK-15細(xì)胞，24 h后測定雙熒光素酶活性。結(jié)果表明，APOA2-1、APOA2-2、APOA2-3均具有熒光活性但相對較低；APOA2-4活性顯著上升，表明-813～-565 bp區(qū)域內(nèi)可能存在一個或多個促進(jìn)APOA2基因轉(zhuǎn)錄的順式作用元件；APOA2-5活性降低，表明-1 032～-813 bp區(qū)域內(nèi)可能存在一個或多個抑制APOA2基因轉(zhuǎn)錄的順式作用元件；APOA2-6、APOA2-7活性略有回升（圖3）。

將構(gòu)建成功的7個啟動子載體質(zhì)粒與p GL3-Basic質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染C2C12、3T3-L1及PK-15細(xì)胞，24 h后測定雙熒光素酶活性。結(jié)果表明，APOA2-1、APOA2-2、APOA2-3均具有熒光活性但相對較低；APOA2-4活性顯著上升，表明-813～-565 bp區(qū)域內(nèi)可能存在一個或多個促進(jìn)APOA2基因轉(zhuǎn)錄的順式作用元件；APOA2-5活性降低，表明-1 032～-813 bp區(qū)域內(nèi)可能存在一個或多個抑制APOA2基因轉(zhuǎn)錄的順式作用元件；APOA2-6、APOA2-7活性略有回升（圖3）。對APOA2-4區(qū)域進(jìn)一步構(gòu)建5個熒光載體并進(jìn)行活性分析，載體命名為2-APOA2-1至2-APOA2-5。雙熒光素酶活性分析結(jié)果表明，2-APOA2-1活性最高，約為APOA2-3活性的5倍（圖4），表明-659～-565 bp區(qū)域更可能存在順式作用元件。


本文編號：3329501