弓形蟲(chóng)病的病原是剛地弓形蟲(chóng)，屬于頂復(fù)門(mén)原蟲(chóng)，這一類病原微生物通過(guò)侵入宿主細(xì)胞并在其中生長(zhǎng)復(fù)制，同時(shí)逃避宿主的免疫應(yīng)答。宿主細(xì)胞的侵入和細(xì)胞內(nèi)蟲(chóng)體的增值對(duì)于弓形蟲(chóng)的生活史和致病性非常重要。目前使用的抗蟲(chóng)體增殖的治療方法，只能夠有效阻斷蟲(chóng)體擴(kuò)散，但同時(shí)也會(huì)促使蟲(chóng)體發(fā)育，因此并不能阻止慢性感染。為了開(kāi)發(fā)一種能真正達(dá)到徹底治療弓形蟲(chóng)感染的藥物，急需深入了解弓形蟲(chóng)調(diào)控蟲(chóng)體復(fù)制和發(fā)育的分子機(jī)制。本研究從弓形蟲(chóng)RH株cDNA中擴(kuò)增AMA1c基因編碼序列，并通過(guò)雙酶切將AMA1c基因分別克隆至原核表達(dá)載體pColdIII和誘餌表達(dá)載體pGBKT7中，構(gòu)建重組質(zhì)粒pColdIII-AMA1c和pGBKT7-AMA1c。將pColdIII-AMA1c轉(zhuǎn)化至大腸桿菌DH5a大量表達(dá)蛋白，之后用GST樹(shù)脂柱對(duì)該蛋白進(jìn)行了純化，SDS-PAGE分析結(jié)果顯示重組的AMA1c蛋白在原核表達(dá)系統(tǒng)中得到大量表達(dá)。將蛋白免疫小鼠制備抗血清，Western blot檢測(cè)表明制備的血清具有良好的特異性。同時(shí)用制備的抗血清為一抗對(duì)AMA1c定位，激光共聚焦觀察到AMA1c定位于弓形蟲(chóng)的頂端。為篩選弓形蟲(chóng)AMA1羧基端基因在弓形... 

【文章來(lái)源】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)吉林省

【文章頁(yè)數(shù)】：44 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略表
第一章 緒論
    1.1 弓形蟲(chóng)概述
    1.2 弓形蟲(chóng)病的類型及臨床表現(xiàn)
    1.3 弓形蟲(chóng) AMA1 的研究進(jìn)展
    1.4 酵母雙雜交的應(yīng)用
    1.5 本研究的目的與意義
第二章 AMA1 羧基端抗血清的制備及鑒定
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    2.4 討論
第三章 弓形蟲(chóng) RH 株文庫(kù)的構(gòu)建及檢測(cè)重組誘餌蛋白的自激活
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.4 討論
第四章 AMA1 羧基端蛋白相互作用細(xì)胞蛋白的篩選及驗(yàn)證
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.4 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]豬外周血單個(gè)核細(xì)胞cDNA酵母表達(dá)文庫(kù)的構(gòu)建及與豬瘟病毒E2蛋白相互作用細(xì)胞蛋白的篩選[J]. 廖亞金,李素,賀番,何文瑞,董泓,馮爍,孫元,仇華吉.  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2013(09)
[2]葡萄糖-6-磷酸脫氫酶的研究進(jìn)展[J]. 安選,劉良忠,胡鵬.  中國(guó)生物制品學(xué)雜志. 2011(06)
[3]DEV-NP基因酵母雙雜交誘餌載體的構(gòu)建及自激活檢測(cè)[J]. 張荷,代淑燕,毛君婷,王開(kāi)功,周碧君,文明.  生物技術(shù)通報(bào). 2011(03)
[4]運(yùn)動(dòng)疲勞對(duì)大鼠紋狀體單胺類遞質(zhì)含量及多巴胺受體表達(dá)的影響[J]. 侯莉娟,劉曉莉,喬德才.  中國(guó)康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志. 2010(07)
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[6]廣州市125萬(wàn)新生兒葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺乏癥篩查和防治[J]. 江劍輝,李蓓,曹偉鋒,蔣翔,賈雪芳,陳倩瑜.  廣東醫(yī)學(xué). 2009(09)
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碩士論文
[1]15種中藥抗弓形蟲(chóng)效果的比較研究[D]. 程雪嬌.延邊大學(xué) 2007
[2]弓形蟲(chóng)SAG2基因的測(cè)序、檢測(cè)及表達(dá)[D]. 陳志強(qiáng).湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007



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