發(fā)布時間：2021-08-08 05:10

　　弓形蟲病的病原是剛地弓形蟲，屬于頂復門原蟲，這一類病原微生物通過侵入宿主細胞并在其中生長復制，同時逃避宿主的免疫應答。宿主細胞的侵入和細胞內蟲體的增值對于弓形蟲的生活史和致病性非常重要。目前使用的抗蟲體增殖的治療方法，只能夠有效阻斷蟲體擴散，但同時也會促使蟲體發(fā)育，因此并不能阻止慢性感染。為了開發(fā)一種能真正達到徹底治療弓形蟲感染的藥物，急需深入了解弓形蟲調控蟲體復制和發(fā)育的分子機制。本研究從弓形蟲RH株cDNA中擴增AMA1c基因編碼序列，并通過雙酶切將AMA1c基因分別克隆至原核表達載體pColdIII和誘餌表達載體pGBKT7中，構建重組質粒pColdIII-AMA1c和pGBKT7-AMA1c。將pColdIII-AMA1c轉化至大腸桿菌DH5a大量表達蛋白，之后用GST樹脂柱對該蛋白進行了純化，SDS-PAGE分析結果顯示重組的AMA1c蛋白在原核表達系統(tǒng)中得到大量表達。將蛋白免疫小鼠制備抗血清，Western blot檢測表明制備的血清具有良好的特異性。同時用制備的抗血清為一抗對AMA1c定位，激光共聚焦觀察到AMA1c定位于弓形蟲的頂端。為篩選弓形蟲AMA1羧基端基因在弓形... 

【文章來源】：吉林農(nóng)業(yè)大學吉林省

【文章頁數(shù)】：44 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略表
第一章 緒論
    1.1 弓形蟲概述
    1.2 弓形蟲病的類型及臨床表現(xiàn)
    1.3 弓形蟲 AMA1 的研究進展
    1.4 酵母雙雜交的應用
    1.5 本研究的目的與意義
第二章 AMA1 羧基端抗血清的制備及鑒定
    2.1 實驗材料
    2.2 實驗方法
    2.3 實驗結果
    2.4 討論
第三章 弓形蟲 RH 株文庫的構建及檢測重組誘餌蛋白的自激活
    3.1 實驗材料
    3.2 實驗方法
    3.3 實驗結果
    3.4 討論
第四章 AMA1 羧基端蛋白相互作用細胞蛋白的篩選及驗證
    4.1 實驗材料
    4.2 實驗方法
    4.3 實驗結果
    4.4 討論
結論
參考文獻
作者簡介
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]豬外周血單個核細胞cDNA酵母表達文庫的構建及與豬瘟病毒E2蛋白相互作用細胞蛋白的篩選[J]. 廖亞金,李素,賀番,何文瑞,董泓,馮爍,孫元,仇華吉.  中國預防獸醫(yī)學報. 2013(09)
[2]葡萄糖-6-磷酸脫氫酶的研究進展[J]. 安選,劉良忠,胡鵬.  中國生物制品學雜志. 2011(06)
[3]DEV-NP基因酵母雙雜交誘餌載體的構建及自激活檢測[J]. 張荷,代淑燕,毛君婷,王開功,周碧君,文明.  生物技術通報. 2011(03)
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碩士論文
[1]15種中藥抗弓形蟲效果的比較研究[D]. 程雪嬌.延邊大學 2007
[2]弓形蟲SAG2基因的測序、檢測及表達[D]. 陳志強.湖南農(nóng)業(yè)大學 2007



本文編號：3329292