狂犬病是由狂犬病病毒（rabies virus,RV）引起的人畜共患病急性傳染病。人被RV感染后,一旦出現(xiàn)神經(jīng)癥狀,幾乎百分之百死亡,我國每年超過1000人死于狂犬病。可見,狂犬病嚴重威脅人類的健康。隨著分子生物學、基因組學和蛋白組學的廣泛應用,對RV各蛋白的功能、致病機制、出芽過程的研究取得巨大進展,但依舊沒有完全透徹。透徹研究這些機制,將有助于治療狂犬病藥物的開發(fā)和免疫疫苗質(zhì)量的提高。目前,由于缺乏適用的RV單克隆或多克隆抗體,嚴重阻礙了我們研究的步伐,適用抗體的研制已成為相關(guān)研究的前提條件。核蛋白（N）蛋白對病毒的轉(zhuǎn)錄復制至關(guān)重要,制備N蛋白抗體用于檢測N蛋白表達量,繼而評價病毒的轉(zhuǎn)錄復制能力。糖蛋白（G）是RV的主要保護性抗原,同時它還與病毒的嗜神經(jīng)性、致病性密切相關(guān),所以制備適用的G蛋白抗體十分必要。N蛋白的主要線性抗原結(jié)構(gòu)區(qū)域位于360-383位氨基酸殘基。本文以RC-HL N基因質(zhì)粒為模板,利用兩對引物RV-NF1/R1、 RV-NF2/R2分別擴增N1-2（350-410位氨基酸）、N3-4（360-451位氨基酸）兩個片段。再利用RV-NF1和RV-NR2兩條末端互補... 

【文章來源】：廣西大學廣西壯族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

N,.}片段的PCR擴增

回收目的片段后用T4連接酶進行連接，轉(zhuǎn)化宿主菌TOP10，抽提質(zhì)粒進行雙酶切鑒定（圖3-2),同時送到Invitrogen公司測序，測序正確將重組質(zhì)粒命名為pET-N〗_4 0 -M 15000 bp ~h'.. M, _ pET-32ajHaHH t'iGI* ■ftiMMif ■‘ ^myB500 bp -jpr^- 4隊德_M-.'遞圖3-2重組質(zhì)粒PET-Nm雙酶切鑒定Fig 3-2 Identification of pET-Nl-4 by restriction enzyme BamH I and Hind IIIM： DNA Marker DL5000； 1： pET-N 1-4/BamH I 和 Hind IIIM： DNA Marker DL5000； 1 ： pET-Nl-4 /BamH I and Hind III3.1.3 pET-Nl-4轉(zhuǎn)化Rosetta重組菌的表達情況參照（2.3.6.2 )的操作步驟進行SDS-PAGE電泳分析重組菌的表達情況，發(fā)現(xiàn)30 °C、0.25 mM IPTG終濃度誘導表達7 h,重組菌表達了大約39 kd的重組蛋白，與預期結(jié)果相符（圖3-3)，誘導的空載體、未誘導的空載體和未誘導重組菌沒有出現(xiàn)此目的蛋白，證明重組質(zhì)粒PET-Nm經(jīng)IPTG誘導能在宿主菌內(nèi)成功表達。26

發(fā)現(xiàn)30 °C、0.25 mM IPTG終濃度誘導表達7 h,重組菌表達了大約39 kd的重組蛋白，與預期結(jié)果相符（圖3-3)，誘導的空載體、未誘導的空載體和未誘導重組菌沒有出現(xiàn)此目的蛋白，證明重組質(zhì)粒PET-Nm經(jīng)IPTG誘導能在宿主菌內(nèi)成功表達。26


本文編號：3328192