片形吸蟲不僅感染牛羊等反芻動物,而且也可感染人體,嚴重威脅著人和動物的健康。因此,建立高效準確的診斷方法是防控該病的研究重點。片形吸蟲包括肝片形吸蟲、大片形吸蟲及其中間型,目前對于大片形吸蟲及其中間型的相關(guān)研究相對較少。因此,本研究選擇大片形吸蟲為研究對象,通過對大片形吸蟲排泄分泌（ES）抗原與宿主的互作,旨在篩選、鑒定及分析出具有診斷潛力的蛋白,為建立大片形吸蟲的診斷方法奠定基礎(chǔ)。本研究分為三部分。第一部分,對大片形吸蟲的鑒定。首先,將采自廣西南寧的144條片形吸蟲蟲體進行形態(tài)學鑒定和分子生物學鑒定。形態(tài)學鑒定這144條蟲體均為片形吸蟲。對這144條蟲體的核糖體第二內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（ITS-2）序列進行了擴增、測序,結(jié)果表明144個PCR樣品的測序結(jié)果區(qū)別于肝片形吸蟲及中間型,而均與大片形吸蟲ITS-2序列（GenBank accession AJ557569）匹配率達99.7%,從而判定分離得到的144條片形吸蟲均為大片形吸蟲,不含中間型。第二部分,大片形吸蟲ES抗原的制備及互作抗原的篩選。首先,利用體外培養(yǎng)方法收集大片形吸蟲蟲卵,對蟲卵進行體外培養(yǎng)孵出毛蚴感染淡水螺,使其在淡水螺體內(nèi)... 

【文章來源】：黑龍江八一農(nóng)墾大學黑龍江省

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 文獻綜述
    1.1 片形吸蟲與片形吸蟲病
        1.1.1 病原
        1.1.2 生活史
        1.1.3 流行情況
        1.1.4 防控
    1.2 大片形吸蟲病診斷的研究進展
        1.2.1 經(jīng)典方法
        1.2.2 免疫診斷方法
        1.2.3 吸蟲抗原的檢測
        1.2.4 分子生物學方法
    1.3 研究的目的與意義
2 材料與方法
    2.1 大片形吸蟲的鑒定
        2.1.1 材料
        2.1.2 方法
    2.2 大片形吸蟲ES抗原的制備及互作抗原的篩選
        2.2.1 材料
        2.2.2 方法
    2.3 大片吸蟲AT和LAP蛋白的免疫反應性分析
        2.3.1 材料
        2.3.2 方法
3 結(jié)果與分析
    3.1 大片形吸蟲的鑒定
        3.1.1 大片形吸蟲形態(tài)學鑒定結(jié)果
        3.1.2 大片形吸蟲ITS
        3.1.3 大片形吸蟲ITS
    3.2 大片形吸蟲ES抗原的制備及互作抗原的篩選
        3.2.1 大片形吸蟲ES抗原免疫家兔后制備多抗的間接ELISA結(jié)果
        3.2.2 免疫共沉淀SDS
        3.2.3 質(zhì)譜數(shù)據(jù)分析
    3.3 大片形吸蟲AT和LAP蛋白的免疫反應性分析
        3.3.1 大片形吸蟲FgAT和FgLAP基因的PCR擴增結(jié)果
        3.3.2 FgAT和FgLAP的理化特性、結(jié)構(gòu)功能域和三級結(jié)構(gòu)預測
        3.3.3 重組質(zhì)粒pGEX-6P-1(+)-FgAT和pET-30a-FgLAP的雙酶切結(jié)果
        3.3.4 重組蛋白的誘導表達結(jié)果
        3.3.5 重組蛋白pGEX-6P-1(+)-FgAT和pET-30a-FgLAP的純化結(jié)果
        3.3.6 目的蛋白的Western Blot分析
4 討論
    4.1 大片形吸蟲的鑒定
    4.2 大片形吸蟲ES抗原的制備及互作抗原的篩選
    4.3 大片形吸蟲AT和LAP蛋白的免疫反應性分析
5 結(jié)論
參考文獻
致謝
個人簡歷



本文編號：3324642