當今,隨著人們生活質(zhì)量的提高,消費者對肉的需求已經(jīng)從數(shù)量變?yōu)橘|(zhì)量。人們更加關(guān)注豬肉的味道,多汁性和嫩度。肌內(nèi)脂肪（IMF）也被稱為大理石紋,是影響豬肉質(zhì)量至關(guān)重要的因素。因此,在保證一定瘦肉率的前提下,適當?shù)奶岣週MF的含量已經(jīng)成為現(xiàn)如今的研究熱點。IMF的含量主要取決于脂肪細胞的生長和發(fā)育,目前豬中關(guān)于IMF的研究還不是很多,并且豬的IMF含量只得到了有限的提高,對其在豬的骨骼肌中積累的具體機制仍是未知數(shù)。本實驗室利用高通量測序的方法,篩選與肌內(nèi)脂肪沉積相關(guān)的miRNAs和基因,以及SNP位點,并初步確定了miR-365-3p和PGk1、CXHXorf23的靶向關(guān)系,通過研究靶向PGk1、CXHXorf23的miR-365-3p及其在C2C12細胞誘導(dǎo)成脂變化中的表達情況,為探究miRNAs以及候選基因調(diào)控肌內(nèi)脂肪在骨骼肌中的沉積的分子機理奠定基礎(chǔ)。取得的主要結(jié)果有：（1）通過構(gòu)建與豬肌內(nèi)脂肪含量相關(guān)的數(shù)字基因表達譜（DGE）,利用生物信息學分析,篩選出來了與肌內(nèi)脂肪含量相關(guān)的44個miRNAs和129個差異表達基因,其中通過Real-Time PCR技術(shù)驗證了高、低肌內(nèi)脂肪含量組差... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
1 前言
    1.1 研究問題的由來
    1.2 豬IMF的研究進展
        1.2.1 IMF的生物學特性
        1.2.2 豬IMF研究現(xiàn)狀
        1.2.3 與IMF相關(guān)候選基因的研究進展
        1.2.4 與IMF相關(guān)通路研究進展
    1.3 miRNAs是調(diào)節(jié)豬IMF的重要因素
        1.3.1 miRNAs的概述
        1.3.2 與IMF相關(guān)miRNAs的研究進展
    1.4 miR-365-3p與候選靶基因PGK1和CXHXorf23的研究
        1.4.1 miR-365-3p的研究現(xiàn)狀
        1.4.2 PGK1和CXHXorf23基因與IMF相關(guān)研究
    1.5 本研究的目的和意義
2 材料和方法
    2.1 材料
        2.1.1 豬組織樣品
        2.1.2 菌株、細胞和載體
            2.1.2.1 試驗用菌株
            2.1.2.2 試驗用細胞系
            2.1.2.3 試驗用載體
        2.1.3 主要試劑及設(shè)備
            2.1.3.1 主要試劑
            2.1.3.2 主要設(shè)備
        2.1.4 主要試劑的配制
        2.1.5 主要軟件及數(shù)據(jù)庫
    2.2 方法
        2.2.1 豬背最長肌組織肌內(nèi)脂肪的測定
        2.2.2 豬高、低IMF組DEM和DEG的篩選與鑒定
            2.2.2.1 組織切片油紅染色
            2.2.2.2 豬背最長肌總RNA抽提及檢測
            2.2.2.3 RT-PCR
            2.2.2.4 高、低IMF組差異miRNA和基因的篩選
        2.2.3 豬IMF GWAS材料準備
        2.2.4 定量引物設(shè)計及條件優(yōu)化
        2.2.5 實時熒光定量PCR(Q-PCR)
        2.2.6 細胞培養(yǎng)及其成脂誘導(dǎo)過程
            2.2.6.1 C2C12細胞的培養(yǎng)
            2.2.6.2 C2C12細胞成脂誘導(dǎo)過程
        2.2.7 細胞轉(zhuǎn)染
        2.2.8 雙熒光素酶檢測
    2.3 引物序列
    2.4 本實驗的技術(shù)路線
3 結(jié)果
    3.1 豬IMF性狀的表型變異結(jié)果
        3.1.1 豬IMF性狀表型結(jié)果
        3.1.2 組織冰凍切片油紅O染色檢測
    3.2 豬IMF GWAS分析結(jié)果
    3.3 高低肌內(nèi)脂肪組DEM、DEG篩選奠定
        3.3.1 樣品的選擇標準
        3.3.2 DEM和DEG的篩選結(jié)果
        3.3.3 DEM和DEG的鑒定結(jié)果
    3.4 豬miR-365-3p的靶基因預(yù)測及其組織表達檢測結(jié)果
        3.4.1 豬miR-365-3p的靶基因預(yù)測
        3.4.2 豬miR-365-3p、PGK1基因和CXHXorf23基因的組織表達譜
    3.5 豬miR-365-3p和PGK1、CXHXorf23基因的靶向關(guān)系驗證
        3.5.1 雙熒光素酶報告基因?qū)嶒炶b定豬miR-365-3p分別與PGK1基因、CXHXorf23基因的靶向關(guān)系驗證
        3.5.2 C2C12細胞誘導(dǎo)成脂及脂肪形成相關(guān)Maker基因的檢測
        3.5.3 豬miR-365-3p在高低IMF組和C2C12細胞誘導(dǎo)成脂過程中的表達模式結(jié)果
        3.5.4 PGK1、CXHXorf23基因在高低IMF組和C2C12細胞誘導(dǎo)成脂過程中的表達模式結(jié)果
        3.5.5 超表達miR-365-3p對不同脂肪相關(guān)Maker基因和靶基因的影響
4 討論
    4.1 miR-365-3p在高低IMF組和C2C12細胞誘導(dǎo)成脂過程表達模式
    4.2 與肌內(nèi)脂肪沉積相關(guān)miRNAs和基因的篩選
    4.3 PGK1和CXHXorf23基因在不同組織中的表達
    4.4 miR-365-3p對C2C12成脂誘導(dǎo)分化的作用
    4.5 關(guān)于miR-365-3p靶向作用PGK1和CXHXorf23基因的應(yīng)用
5 小結(jié)
    5.1 本研究得到的結(jié)果
    5.2 本研究的創(chuàng)新點
    5.3 本研究的不足及下一步工作意見
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]豬PID1基因CDS區(qū)的克隆及其mRNA表達與肌內(nèi)脂肪沉積關(guān)系[J]. 錢源,曾勇慶,杜金芳,崔景香,李華,陳其美,宋一萍,陳偉.  遺傳. 2010(11)
[2]豬肌內(nèi)脂肪的研究進展[J]. 譚林,姜海龍.  畜牧與飼料科學. 2010(09)
[3]牛肌內(nèi)脂肪的研究進展[J]. 董丹萍,馬儷珍.  農(nóng)產(chǎn)品加工. 2010(08)
[4]日糧能量蛋白質(zhì)水平對榮昌烤乳豬品系生長性能和肉質(zhì)性狀的影響[J]. 陳德志,余冰,陳代文.  動物營養(yǎng)學報. 2009(05)
[5]日糧能量水平對生長育肥豬肌內(nèi)脂肪含量以及脂肪酸合成酶和激素敏感脂酶mRNA表達的影響[J]. 劉作華,楊飛云,孔路軍,周曉容,辜玉紅,王孝友.  畜牧獸醫(yī)學報. 2007(09)
[6]豬肌內(nèi)脂肪酸的研究進展[J]. 李慶崗,經(jīng)榮斌.  飼料博覽. 2004(03)
[7]肌肉內(nèi)脂肪的研究進展[J]. 侯生珍.  甘肅畜牧獸醫(yī). 2000(03)



本文編號：3321926