BAMBI（BMP and Activin Membrane-bound Inhibitor）是轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）通路上的抑制型偽受體,與TGF-βⅠ型受體競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合配體與TGF-βⅡ型受體復(fù)合物,可以抑制TGF-β通路的信號(hào)傳導(dǎo)。最近在癌癥等疑難病癥中的研究發(fā)現(xiàn)BAMBI在TGF-β通路中的調(diào)控作用至關(guān)重要,尤其在卵巢癌中有顯著的差異表達(dá),但其在卵母細(xì)胞發(fā)育中的調(diào)控作用還鮮為人知。為了探究BAMBI基因?qū)β涯讣?xì)胞以及胚胎發(fā)育過(guò)程中的影響,本試驗(yàn)采取不同的基因超表達(dá)方式,分別從直接作用與間接作用的角度驗(yàn)證了BAMBI基因?qū)β涯讣?xì)胞發(fā)育的影響,并探明其調(diào)控機(jī)理,結(jié)果如下:（1）BAMBI基因可以促進(jìn)卵母細(xì)胞成熟,同時(shí)抑制了周圍顆粒細(xì)胞的增殖與貼壁能力,但促進(jìn)了顆粒細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)遷移能力。（2）結(jié)合卵丘卵母細(xì)胞的分離共培養(yǎng)試驗(yàn),發(fā)現(xiàn)了破壞卵丘顆粒細(xì)胞和卵母細(xì)胞之間的間隙連接會(huì)影響B(tài)AMBI的作用,即這種間接作用依賴于間隙連接。（3）體外克隆BAMBI基因,連接真核載體,轉(zhuǎn)錄后注射體GV（未成熟的生發(fā)泡）時(shí)期的卵母細(xì)胞后發(fā)現(xiàn)B... 

【文章來(lái)源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：48 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

TGF-β通路作用示意圖(Massagué,2003)

圖 3-1 BAMBI 基因?qū)?COC 的影響Figure 3-1 Effect of gene BAMBI on COCA：在 20 個(gè) COC 的體外成熟培養(yǎng)液中加入 0.5 μL 滴度為 1.26 ×1011PFU/ml 腺病毒 HBAD-BAMBIB：將 0.5μL 滴度為 1.58×1011PFU / ml 的 HBAD-GFP 添加到 20 個(gè) COC 的成熟培養(yǎng)液中。C：沒(méi)有病毒轉(zhuǎn)染的 COC 培養(yǎng)。 然后觀察處理后 44h 后顆粒細(xì)胞的貼壁增殖能力。與 GFP 組對(duì)比，BAMB降低了顆粒細(xì)胞的貼壁和增殖能力。D：上述處理后在熒光顯微鏡下的觀察結(jié)果。A: 0.5 μL HBAD-BAMBI with a titer of 1.26 ×1011PFU/ml was added to in vitro maturation mediucontaining 20 COCs. B: 0.5 μL of HBAD-GFP at a titer of 1.58 x 1011PFU/ml was added to the maturatiomedium containing 20 COCs. C: COC culture without virus transfection. Then the adhesion anproliferation ability of the granular cells were observed after treatment for 44h. Compared to the GFP grouBAMBI reduced the ability of adhesion and proliferation of the granular cells. D: Observations under thfluorescence microscope after above treatment.

BAMBI 基因?qū)ωi卵母細(xì)胞發(fā)育的影響不同滴度的轉(zhuǎn)基因腺病毒培養(yǎng)液中培養(yǎng)后，經(jīng)過(guò)倍比稀釋的度，進(jìn)行 COC 的轉(zhuǎn)基因培養(yǎng)。每組 20 個(gè) COC，分為空白FP組，以及轉(zhuǎn)基因?qū)φ誈FP組。所選取的COC 形態(tài)與質(zhì)量相、100%飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 44 小時(shí)后，觀察各組的第的生長(zhǎng)狀況，從而對(duì)比分析 BAMB 基因?qū)β涯讣?xì)胞成熟發(fā)示：沒(méi)有經(jīng)過(guò)病毒處理的空白對(duì)照組的 COC 表現(xiàn)為顆粒細(xì)器輕輕吹打便可全部脫落（圖 3-1 C），而使用腺病毒轉(zhuǎn)染顆粒細(xì)胞擴(kuò)散受阻，顆粒細(xì)胞貼壁增殖明顯（圖 3-1 B）。然組時(shí)發(fā)現(xiàn)這種顆粒細(xì)胞的貼壁增殖現(xiàn)象又的到了逆轉(zhuǎn)，也就現(xiàn)象（圖 3-1A）。綜上所述，我們觀察到在正常情況下的無(wú)擴(kuò)散并脫落，而經(jīng)腺病毒處理后的對(duì)照組中改變了顆粒細(xì)胞增殖能力增加，但是轉(zhuǎn)入 BAMBI 基因后的試驗(yàn)組又有顆粒

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]TGF-βRⅠ及Smad2表達(dá)情況對(duì)綿羊腔前卵泡發(fā)育的影響[J]. 常迪,董曉晨,郭勇,劉云海,齊曉龍,盛熙暉,倪和民.  中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào). 2016(32)
[2]卵母細(xì)胞分泌因子在人卵丘顆粒細(xì)胞中的表達(dá)及其與卵母細(xì)胞發(fā)育潛能的關(guān)系[J]. 吳小華,程立立,張敏,焦保權(quán),朱愛(ài)萍,常秀峰,徐清華,李冬秀,包莉莉,許鵬宇.  生殖與避孕. 2016(09)
[3]TGF-β信號(hào)傳導(dǎo)通路及其生物學(xué)功能[J]. 劉镕,趙琴平,董惠芬,蔣明森.  中國(guó)病原生物學(xué)雜志. 2014(01)
[4]TGF-β超家族在人卵母細(xì)胞發(fā)生中的調(diào)控作用[J]. 冷少華,梁志清,王鳳英.  重慶醫(yī)學(xué). 2009(14)
[5]韌帶愈合過(guò)程中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1及其Ⅰ型受體表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 張喜善,羅懷燦,魯玉來(lái),王信勝,董軍.  中國(guó)矯形外科雜志. 2001(05)

碩士論文
[1]下調(diào)Dlg1對(duì)豬卵母細(xì)胞體外發(fā)育的影響[D]. 李科瑛.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2017



本文編號(hào)：3320235