NS3蛋白是坦布蘇病毒（Duck Tembusu virus,TMUV）非結(jié)構(gòu)蛋白中的重要成員,其包含三個(gè)結(jié)構(gòu)域S7、DEXDc和HELICc,每個(gè)結(jié)構(gòu)域各自分別具有絲氨酸蛋白酶,核苷酸三磷酸酶和RNA解旋酶活性,其具有多種生物學(xué)功能,參與病毒生命周期調(diào)控和宿主內(nèi)抗病毒免疫反應(yīng)�；诮湍鸽p雜交系統(tǒng),在本研究中,先將構(gòu)建好的陽(yáng)性重組質(zhì)粒pGBKT7-NS3轉(zhuǎn)化到酵母Y2H菌株中,證明它沒(méi)有自激活能力和毒性,表明誘餌酵母菌已經(jīng)準(zhǔn)備完成,可以進(jìn)行后續(xù)的篩選工作。將復(fù)蘇后的鴨胚成纖維細(xì)胞cDNA文庫(kù)的獵物酵母菌株與誘餌酵母菌株進(jìn)行雜交混合培養(yǎng),得到誘餌與獵物質(zhì)粒共同存在的雜合二倍體酵母細(xì)胞。雜交后在營(yíng)養(yǎng)缺陷型培養(yǎng)基上進(jìn)行不同強(qiáng)度層次的篩選,先在低篩選強(qiáng)度的SD/-Trp/-Leu培養(yǎng)皿上進(jìn)行篩選,以獲得較多無(wú)表型且生長(zhǎng)狀態(tài)良好的酵母菌落,一對(duì)一進(jìn)行轉(zhuǎn)板,用較高篩選強(qiáng)度的DDO/X/A培養(yǎng)皿篩選出藍(lán)色陽(yáng)性克隆,再一對(duì)一轉(zhuǎn)板到QDO/X/A上進(jìn)行高篩選力培養(yǎng),挑取陽(yáng)性克隆接種到QDO/X/A重復(fù)篩選,以此得到更多、更為準(zhǔn)確且重復(fù)性更高的陽(yáng)性結(jié)果。與NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì),提示篩選出了七種與NS3存在潛... 

【文章來(lái)源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：86 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

TMUV基因組結(jié)構(gòu)圖

坦布蘇病毒 NS3 蛋白互作宿主蛋白的篩選、驗(yàn)證反應(yīng)中的活躍程度（Gebhard et al., 2012）；其中，用伴隨其錨定到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上，從而促進(jìn) NS3 解旋酶的解旋率（Shiryaev et al., 2009）。它同時(shí)又可以協(xié)NA 依賴(lài)性 RNA 聚合酶（RNA-dependent RNA p程中，它能夠協(xié)助分離瞬時(shí)形成的 dsRNA 中間體。三者的復(fù)合物，在 DENV 感染的宿主細(xì)胞內(nèi)能夠協(xié)W lk B et al., 2012）；也有相關(guān)研究顯示 NS3 蛋白，被歸為類(lèi)似前凋亡蛋白，以觸發(fā)宿主細(xì)胞凋亡，

一種蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)復(fù)合物，則在空間上重構(gòu)這兩個(gè)結(jié)構(gòu)域，由此可告基因的轉(zhuǎn)錄（Wang et al., 2018）。將重構(gòu)后的對(duì)應(yīng)載體分別轉(zhuǎn)化進(jìn)系統(tǒng)中，如果誘餌和獵物相互作用，DNA-BD 結(jié)合域識(shí)別后并錨定，而此時(shí)與之互作的 pGal4 激活域能轉(zhuǎn)錄激活 UAS 啟動(dòng)子所控制編基因。四種常用的報(bào)告基因是 AUR1-C、ADE2、HIS3 和 MEL1，他達(dá)，可以使酵母菌具備在營(yíng)養(yǎng)缺陷培養(yǎng)基上仍能正常生長(zhǎng)的特性。為篩選到的假陽(yáng)性克隆，培養(yǎng)基中加入 X-α-Gal，可使 LacZ 表達(dá)之后顯行分辨和篩選（Walhout et al., 2001）。雙雜交技術(shù)近年來(lái)已被廣泛應(yīng)用于蛋白研究領(lǐng)域，漸漸成為發(fā)現(xiàn)和研和蛋白質(zhì)之間相互作用的基礎(chǔ)平臺(tái)。酵母雙雜交系統(tǒng)建立在真核生物白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用，即使是蛋白質(zhì)之間短暫存在的微弱瞬時(shí)效應(yīng)因產(chǎn)物被敏感地檢測(cè)到，該技術(shù)原理簡(jiǎn)單，應(yīng)用廣泛，這將為相關(guān)研面上的支持（Hamdi et al., 2012）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]PRDX家族蛋白與腫瘤的發(fā)生發(fā)展[J]. 呂麗娜,黃贊松,王小超.  右江民族醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2018(02)
[2]NALP3炎性復(fù)合體及p38 MAPK信號(hào)通路在氧化應(yīng)激中的作用及阿魏酸鈉的干預(yù)機(jī)制[J]. 汪蓮,謝敏,況菊.  四川大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2018(02)
[3]穩(wěn)定過(guò)表達(dá)人MGST1基因抑制肺腺癌細(xì)胞SPC-A-1的凋亡[J]. 曾寶真,葛春蕾,付橋粉,張志偉,宋鑫,黃文華.  中國(guó)腫瘤生物治療雜志. 2017(06)
[4]坦布蘇病毒在種鴨中的垂直傳播[J]. 張英,趙丹丹,刁有祥,陳浩,提金鳳,張璐,楊國(guó)平.  中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2016(11)
[5]過(guò)氧化物還原酶在MAPK信號(hào)通路中的調(diào)節(jié)作用[J]. 郭芳,符民桂,姜志勝.  中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志. 2016(11)
[6]雞病防控中的主要生物安全措施[J]. 王宗海.  養(yǎng)禽與禽病防治. 2014(12)
[7]探針檢測(cè)鴨黃病毒的地高辛標(biāo)記DNA的制備與應(yīng)用[J]. 高緒慧,刁有祥,唐熠,于春梅,張大丙,岳澄濱.  中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2012(04)
[8]鴨坦布蘇病毒研究進(jìn)展[J]. 朱麗萍,顏世敢.  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2012(01)
[9]坦布蘇病毒致病特性及其流行病學(xué)[J]. 萬(wàn)春和,黃瑜.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2011(12)
[10]鴨坦布蘇病毒病病原的分離鑒定及生物學(xué)特性研究[J]. 李澤君.  中國(guó)家禽. 2011(17)

博士論文
[1]鴨坦布蘇病毒細(xì)胞適應(yīng)毒免疫原性及致弱分子基礎(chǔ)研究[D]. 章麗嬌.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[2]PRDX3和UNG1在氧化應(yīng)激中相互作用的機(jī)制研究[D]. 劉志磊.清華大學(xué) 2016
[3]過(guò)氧化物酶6（Peroxiredoxin 6）在肝細(xì)胞肝癌中的表達(dá)和作用機(jī)制研究[D]. 魯?shù)?浙江大學(xué) 2016
[4]坦布蘇病毒ZC株感染性克隆的構(gòu)建和部分3’非編碼區(qū)功能的初步研究[D]. 陳浩.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[5]鴨坦布蘇病毒生物學(xué)特性、基因組特征、診斷方法以及感染性克隆的研究[D]. 于可響.揚(yáng)州大學(xué) 2013
[6]坦布蘇病毒的分離鑒定及重組腺病毒介導(dǎo)shRNA抑制坦布蘇病毒在體外復(fù)制的研究[D]. 唐熠.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[7]丙型肝炎病毒非結(jié)構(gòu)蛋白3解旋酶保守性表位單克隆抗體及其意義[D]. 邊奕鑫.南方醫(yī)科大學(xué) 2013

碩士論文
[1]鴨坦布蘇病毒核酸免疫的初步建立[D]. 張澤.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018
[2]p38MAPK和JNK信號(hào)通路在甲狀腺功能減退雄性大鼠睪丸線(xiàn)粒體氧化應(yīng)激中的作用研究[D]. 常曉茹.蘭州大學(xué) 2018
[3]日本乙型腦炎病毒NS4B蛋白與NS3解旋酶的相互作用研究[D]. 呂博敏.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[4]MGST1抑制肺腺癌細(xì)胞的凋亡及其機(jī)制研究[D]. 曾寶真.南方醫(yī)科大學(xué) 2017
[5]利用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選PEDV蛋白間互作及與nsp14、nsp16互作的宿主蛋白[D]. 焦永.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[6]乙型腦炎病毒NS1蛋白的宿主互作蛋白篩選與鑒定[D]. 周玉鵬.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[7]基于轉(zhuǎn)錄組分析的PUB蛋白與甘藍(lán)S-位點(diǎn)受體激酶的相互作用研究[D]. 畢云龍.西南大學(xué) 2016
[8]坦布蘇病毒對(duì)櫻桃谷育成鴨的致病性研究[D]. 路云建.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[9]穩(wěn)定表達(dá)乙型腦炎病毒NS2B/NS4B細(xì)胞系的構(gòu)建及其在篩選互作蛋白中的初步應(yīng)用[D]. 徐秋萍.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[10]坦布蘇病毒NS5蛋白單克隆抗體的制備與鑒定及快速檢測(cè)膠體金試紙條方法的建立[D]. 楊國(guó)平.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015



本文編號(hào)：3316282