豬流行性腹瀉病毒（PEDV）和傳染性胃腸炎病毒（TGEV）均可感染各個年齡段的豬,尤其對哺乳仔豬的致死率極高,給我國養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重影響。S蛋白是位于PEDV和TGEV病毒粒子囊膜表面的纖突糖蛋白,是誘導(dǎo)機體產(chǎn)生抗病毒中和抗體的主要靶標(biāo)。S基因是目前研究PEDV和TGEV疫苗的重要靶標(biāo)抗原基因。由于PEDV和TGEV的S基因容易發(fā)生變異,導(dǎo)致目前的滅活和弱毒苗的免疫保護效力降低,因此亟需更安全高效的疫苗。PEDV S蛋白中的COE區(qū)域和TGEV S蛋白的A、D抗原位點結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、高度保守并且具有良好的免疫原性,是誘導(dǎo)機體產(chǎn)生中和抗體的主要結(jié)構(gòu)域。核酸疫苗具備亞單位疫苗的安全性和弱毒疫苗的時效性,能夠更好地激起機體的體液和細胞免疫應(yīng)答。在小鼠模型中PEDV和TGEV的核酸疫苗均能夠刺激小鼠產(chǎn)生保護性中和抗體及細胞免疫應(yīng)答。如何有效的提高核酸疫苗抗原的免疫原性,一直是該疫苗研發(fā)的關(guān)鍵。大腸桿菌不耐熱腸毒素B亞基（LTB）是一種能夠增強機體免疫應(yīng)答的新型疫苗免疫佐劑。目前為止未見有將LTB作為TGEV和PEDV核酸疫苗佐劑的相關(guān)研究報道。本研究開展了關(guān)于TGEV和PEDV的S蛋白的融合基因和LT... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

PT、LTB基因的擴增Fig.4-1AmplificationproductsofPT、LTBgene

3 重組真核表達載體的酶切鑒定對陽性重組質(zhì)粒 pPT、pLTB 和 pPT-LTB 質(zhì)粒分別用 Nhe /EcoRI、SalI/NNotI/Nhe /EcoRI 進行酶切鑒定，結(jié)果如圖 4-3，酶切的條帶大小與預(yù)期相體構(gòu)建成功。圖 4-2 重組真核表達載體相關(guān)圖譜Fig.4-2 The profile of recombinant eukaryotic expression vectorA：pIRES 圖譜；B：pLTB 圖譜；C：pPT 圖譜；D：pPT-LTB 圖譜

表達載體的酶切鑒定粒 pPT、pLTB 和 pPT-LTB 質(zhì)粒分別用 Nhe I 進行酶切鑒定，結(jié)果如圖 4-3，酶切的條帶圖 4-2 重組真核表達載體相關(guān)圖譜-2 The profile of recombinant eukaryotic expressionpIRES 圖譜；B：pLTB 圖譜；C：pPT 圖譜；D：pPT-LTB

【參考文獻】：
期刊論文
[1]黏膜佐劑大腸埃希菌不耐熱腸毒素B亞單位優(yōu)化的淋病奈瑟菌孔洞蛋白B核酸疫苗的構(gòu)建及其誘導(dǎo)小鼠的免疫應(yīng)答[J]. 陳敏,胡四海,王玉峰,戴志兵,張愉快,余敏君,李忠玉,朱翠明,陸春雪.  中華傳染病雜志. 2011 (04)
[2]豬傳染性胃腸炎病毒TH-98株S基因核酸疫苗的構(gòu)建及其免疫效力[J]. 任曉峰,尹杰超,司微,李一經(jīng),劉寶全.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2006(03)

碩士論文
[1]TGEV S/M雙基因減毒沙門氏菌核酸疫苗株初步構(gòu)建研究[D]. 劉佳文.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[2]豬流行性腹瀉病毒重組沙門氏菌的構(gòu)建及免疫原性分析[D]. 徐麗麗.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[3]豬傳染性胃腸炎和流行性腹瀉二聯(lián)核酸疫苗免疫效力研究[D]. 孟凡丹.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[4]豬IL-12和IL-18對TGEV S基因核酸疫苗免疫效應(yīng)的研究[D]. 李訓(xùn)良.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[5]PEDV S與豬IL-18聯(lián)合DNA疫苗免疫效果研究[D]. 斯琴高娃.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011



本文編號：3315210