惡性瘧原蟲膜蛋白Pf332功能及細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制分析
發(fā)布時(shí)間:2021-07-31 18:59
瘧疾是由瘧原蟲引起的蟲媒性傳染病。近些年,由于瘧原蟲抗藥性的產(chǎn)生和迅速擴(kuò)散,給瘧疾藥物防治帶來嚴(yán)重挑戰(zhàn)。研制安全有效的疫苗是預(yù)防瘧疾感染和控制瘧疾流行的主要手段。根據(jù)瘧原蟲在人體內(nèi)的生活史特征,目前瘧疾疫苗的研究主要針對(duì)紅細(xì)胞前期和紅細(xì)胞內(nèi)期。其中,紅細(xì)胞內(nèi)期疫苗能直接降低宿主的發(fā)病率和死亡率,所以對(duì)紅細(xì)胞內(nèi)期蟲體蛋白質(zhì)特性及其與紅細(xì)胞膜骨架的作用機(jī)制的研究備受關(guān)注。寄生在紅細(xì)胞內(nèi)的惡性瘧原蟲合成多種蛋白質(zhì)并分泌到紅細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中,其中Pf332是惡性瘧原蟲基因組所編碼的分子量最大的蛋白質(zhì),含有DBL、TM和WR三個(gè)功能區(qū)。該蛋白質(zhì)被認(rèn)為是介導(dǎo)蟲體在紅細(xì)胞內(nèi)發(fā)育、擴(kuò)增的重要功能成分。為進(jìn)一步分析惡性瘧原蟲Pf332分子的功能及合成和轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制,本研究構(gòu)建了編碼融合有GFP標(biāo)簽的Pf332功能區(qū)(包括DBL-GFP、TM-GFP、WR-GFP、TMWR-GFP和DBLTM-GFP)的重組質(zhì)粒。將質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染到惡性瘧原蟲3D7蟲株內(nèi),通過活體熒光實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)DBL、TM、WR、TM-WR、DBL-TM不同功能區(qū)蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)和分布情況。同時(shí),運(yùn)用間接免疫熒光共定位方法觀察蛋白質(zhì)DBL-GF...
【文章來源】:吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】:83 頁
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【部分圖文】:
輸出蛋白復(fù)合物PTEX結(jié)構(gòu)
只有 PfEMP1 蛋白質(zhì)的功能已被確定[70,71]。其它的蛋白包括 Pf332,Surfin,Stevor,Rifin 等的功能均不十分清楚。PfEMP1 是在宿主的染蟲紅細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生的,能夠引起紅細(xì)胞表面疣狀突起(knob 結(jié)構(gòu)),促使瘧原蟲產(chǎn)生毒性,能夠有效逃避宿主清除機(jī)制,以及引起包括腦瘧在內(nèi)的宿主臟器功能受損。Pf332 分子是研究發(fā)現(xiàn)的惡性瘧原蟲基因組編碼的分子量最大的蛋白質(zhì),在瘧原蟲發(fā)育晚期通過典型的高爾基體分泌途徑轉(zhuǎn)運(yùn)到染蟲紅細(xì)胞膜表面? Pf332 的抗體可以抑制體外培養(yǎng)的蟲體生長(zhǎng)[72],通過影響紅細(xì)胞的通透性[73]、可塑性及有關(guān)功能的改變來促進(jìn)紅細(xì)胞膜的裂解和裂殖子的釋放[74]。
模板 DNA 110×PCR Buffer 2.5dNTP Mixture (10mM) 2forward primer 1reverse primer 1Ex Taq Polymerase(5U/μL) 0.25ddH2O 17.25總體積 25蟲培養(yǎng)結(jié)果中吸取少量培養(yǎng)液,涂片,吉姆薩和吖啶橙染色后.1)。如圖所示,培養(yǎng) 12 h 和 24 h 為早期滋養(yǎng)體時(shí)期蟲體、48 h 為裂殖體時(shí)期蟲體。
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]瘧疾的防控現(xiàn)狀及進(jìn)展[J]. 車河龍,林棟. 熱帶醫(yī)學(xué)雜志. 2010(02)
[2]基因工程疫苗及發(fā)展前景[J]. 陳啟軍,尹繼剛,胡哲,姜寧,肖月. 中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào). 2007(09)
[3]云南省瀾滄縣瘧疾流行及其防治現(xiàn)狀[J]. 董瑩,胡繼成,呂時(shí)生,周玉斌,王興榮,郭曉芳,李春富,李麗,劉慧,李菊升,肖有林. 中國(guó)寄生蟲病防治雜志. 2005(05)
本文編號(hào):3314014
【文章來源】:吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】:83 頁
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【部分圖文】:
輸出蛋白復(fù)合物PTEX結(jié)構(gòu)
只有 PfEMP1 蛋白質(zhì)的功能已被確定[70,71]。其它的蛋白包括 Pf332,Surfin,Stevor,Rifin 等的功能均不十分清楚。PfEMP1 是在宿主的染蟲紅細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生的,能夠引起紅細(xì)胞表面疣狀突起(knob 結(jié)構(gòu)),促使瘧原蟲產(chǎn)生毒性,能夠有效逃避宿主清除機(jī)制,以及引起包括腦瘧在內(nèi)的宿主臟器功能受損。Pf332 分子是研究發(fā)現(xiàn)的惡性瘧原蟲基因組編碼的分子量最大的蛋白質(zhì),在瘧原蟲發(fā)育晚期通過典型的高爾基體分泌途徑轉(zhuǎn)運(yùn)到染蟲紅細(xì)胞膜表面? Pf332 的抗體可以抑制體外培養(yǎng)的蟲體生長(zhǎng)[72],通過影響紅細(xì)胞的通透性[73]、可塑性及有關(guān)功能的改變來促進(jìn)紅細(xì)胞膜的裂解和裂殖子的釋放[74]。
模板 DNA 110×PCR Buffer 2.5dNTP Mixture (10mM) 2forward primer 1reverse primer 1Ex Taq Polymerase(5U/μL) 0.25ddH2O 17.25總體積 25蟲培養(yǎng)結(jié)果中吸取少量培養(yǎng)液,涂片,吉姆薩和吖啶橙染色后.1)。如圖所示,培養(yǎng) 12 h 和 24 h 為早期滋養(yǎng)體時(shí)期蟲體、48 h 為裂殖體時(shí)期蟲體。
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]瘧疾的防控現(xiàn)狀及進(jìn)展[J]. 車河龍,林棟. 熱帶醫(yī)學(xué)雜志. 2010(02)
[2]基因工程疫苗及發(fā)展前景[J]. 陳啟軍,尹繼剛,胡哲,姜寧,肖月. 中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào). 2007(09)
[3]云南省瀾滄縣瘧疾流行及其防治現(xiàn)狀[J]. 董瑩,胡繼成,呂時(shí)生,周玉斌,王興榮,郭曉芳,李春富,李麗,劉慧,李菊升,肖有林. 中國(guó)寄生蟲病防治雜志. 2005(05)
本文編號(hào):3314014
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