為了進一步研究單增李斯特菌分泌的細菌侵襲相關蛋白內(nèi)化素B（InlB）的功能,試驗通過原核表達載體pET-28a分別表達InlB的N36～321和C392～630,并通過Ni²⁺親和層析柱對重組蛋白進行純化,純化的蛋白免疫Balb/c小鼠,制備多克隆抗體,通過Western-blot檢測單增李斯特菌InlB的表達情況。結(jié)果表明:成功構(gòu)建重組表達質(zhì)粒及誘導表達重組蛋白,制備的針對InlB N端和C端的多克隆抗體均能特異性檢測單增李斯特菌中的InlB,但不能通過免疫熒光檢測該菌表面的InlB。說明本研究制備的多克隆抗體可進一步用于研究單增李斯特菌InlB的功能。 

【文章來源】：黑龍江畜牧獸醫(yī). 2020,(10)北大核心

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

inlB片段的擴增結(jié)果

為了驗證制備的多克隆抗體的特異性,試驗通過Western-blot和免疫熒光檢測InlB在單增李斯特菌中的表達情況。Western-blot結(jié)果表明,InlBN36～321的多克隆抗體和InlBC392～630的多克隆抗體均能在EGDe-prfAM7和菌體裂解液中檢測到InlB的特異性條帶,而inlB基因缺失株EGDe-prfAM7-ΔinlB中則無相應的條帶,見圖8,表明制備的兩種多克隆抗體均可用于InlB的檢測;但兩種多克隆抗體均不能通過免疫熒光檢測菌體表面的InlB。圖5 BL21轉(zhuǎn)化重組質(zhì)粒的鑒定結(jié)果

BL21轉(zhuǎn)化重組質(zhì)粒的鑒定結(jié)果


本文編號：3313687