發(fā)布時間：2021-07-29 16:04

　　為了了解IGF-工基因及IGF結(jié)合蛋白在內(nèi)蒙古絨山羊皮膚毛囊中的表達調(diào)控作用及IGFBP-5基因在染色體中的定位,通過實時熒光定量PCR、熒光原位雜交（FISH）技術(shù)等實驗研究,得到以下結(jié)論：1驗證了IGF-I基因在內(nèi)蒙古白絨山羊皮膚毛囊中的表達模式,發(fā)現(xiàn)其表達與毛囊的周期性發(fā)育相一致：2明確了在毛囊發(fā)育興盛期有兩種IGF結(jié)合蛋白即IGFBP-3和IGFBP-5高表達,這與前人在人和小鼠的皮膚毛囊中的研究結(jié)果一致；3對IGFBP-3和IGFBP-5基因在皮膚毛囊發(fā)育的各個時期的表達情況進行了研究,發(fā)現(xiàn)IGFBP-3雖然在興盛期的表達量高于IGFBP-5基因,但是其在調(diào)控毛囊發(fā)育周期中的規(guī)律性不如IGFBP-5明顯。因此,本研究推斷,在內(nèi)蒙古白絨山羊的皮膚毛囊發(fā)育中IGFBP-5基因可能發(fā)揮重要的調(diào)控作用；4對IGFBP-5基因在內(nèi)蒙古絨山羊的染色體上進行了定位,并對FISH實驗條件進行了一些探索性研究。 

【文章來源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
插圖和附表清單
1 引言
    1.1 絨山羊概述
    1.2 毛囊的發(fā)生與周期性變化
        1.2.1 絨山羊毛被特點
        1.2.2 毛囊的周期性發(fā)育變化
    1.3 胰島素樣生長因子系統(tǒng)
        1.3.1 胰島素樣生長因子(IGFs)的分子生物學(xué)特性
        1.3.2 IGF-I的生理功能
        1.3.3 胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白(IGFBPs)
        1.3.4 胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白5(IGFBP-5)在毛囊發(fā)育中的研究
    1.4 熒光原位雜交(fluorescence in situ hybrization,FISH)
        1.4.1 FISH的原理及方法
        1.4.2 FISH的研究及其應(yīng)用
    1.5 本研究的目的與意義
        1.5.1 本研究擬解決的問題
        1.5.2 本研究的意義
2 試驗一 IGFBPs在絨山羊皮膚中的表達量研究
    2.1 試驗材料
        2.1.1 試驗樣品
        2.1.2 主要試劑和儀器
        2.1.3 引物合成
    2.2 試驗方法
        2.2.1 樣品RNA的提取與cDNA第一鏈的合成
        2.2.2 IGF-I基因反轉(zhuǎn)錄PCR
        2.2.3 IGF-I基因?qū)崟r定量PCR
        2.2.4 IGFBP 1-6基因?qū)崟r定量PCR
        2.2.5 IGFBP-3基因和IGFBP-5基因在皮膚中一年12月份的表達變化
    2.3 結(jié)果分析
        2.3.1 總RNA提取檢測結(jié)果
        2.3.2 IGF-I基因反轉(zhuǎn)錄PCR結(jié)果
        2.3.3 IGF-I基因?qū)崟r定量PCR結(jié)果
        2.3.4 IGFBP1-6基因?qū)崟r定量PCR結(jié)果
        2.3.5 IGFBP-3基因和IGFBP-5基因在皮膚中一年12月份的表達變化
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
3 試驗二 IGFBP-5基因的FISH定位
    3.1 染色體標本的制備
        3.1.1 實驗材料
        3.1.2 實驗方法
    3.2 IGFBP-5基因探針制備
        3.2.1 實驗材料
        3.2.2 實驗方法
    3.3 IGFBP-5基因定位
        3.3.1 主要實驗溶液及配制方法
        3.3.2 主要實驗儀器
        3.3.3 實驗方法
    3.4 實驗結(jié)果與分析
        3.4.1 染色體標本制備結(jié)果
        3.4.2 陽性BAC菌體PCR鑒定
        3.4.3 克隆鑒定及測序
        3.4.4 BAC質(zhì)粒提取檢測結(jié)果
        3.4.5 IGFBP-5基因定位結(jié)果
        3.4.6 雜交信號的定位
    3.5 討論
        3.5.1 細胞培養(yǎng)條件的摸索
        3.5.2 染色體標本制備過程中的注意事項
        3.5.3 質(zhì)粒提取過程中的注意事項
        3.5.4 雜交過程的注意事項
    3.6 結(jié)論
4 全文結(jié)論
致謝
參考文獻
附錄
作者簡介


【參考文獻】：
期刊論文
[1]LALBA基因SNP與內(nèi)蒙古白絨山羊經(jīng)濟性狀的關(guān)聯(lián)[J]. 藍賢勇,陳宏,田智泉,劉少卿,張永斌,王昕,房興堂.  遺傳. 2008(02)
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[3]放牧條件下絨山羊絨毛季節(jié)性生長變化規(guī)律的研究[J]. 牛一兵,賈志海,盧德勛,郭寶林,孔祥浩,王潤蓮.  動物營養(yǎng)學(xué)報. 2005(02)
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[5]試論21世紀初葉中國養(yǎng)羊業(yè)的持續(xù)發(fā)展問題[J]. 趙有璋.  中國草食動物. 2001(S1)
[6]絨山羊絨毛生長調(diào)控機理研究進展[J]. 李金泉,尹俊,周歡敏.  中國草食動物. 2001(03)
[7]不同無機硫?qū)?nèi)蒙古白絨山羊消化代謝的影響[J]. 彭玉麟,賈志海,盧德勛,李玉榮,牛文藝,娜仁,任曉萍.  中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2001(03)

博士論文
[1]絨山羊BAC文庫的構(gòu)建與鑒定以及絨毛生長發(fā)育相關(guān)基因的篩選[D]. 劉志紅.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009
[2]北京油雞細菌人工染色體文庫的構(gòu)建與肉質(zhì)風(fēng)味相關(guān)基因的研究[D]. 吳宏梅.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2008
[3]內(nèi)蒙古絨山羊育種方法的研究[D]. 李金泉.中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005

碩士論文
[1]內(nèi)蒙古阿爾巴斯白絨山羊毛囊生長周期性變化與KAP6 cDNA的特征分析[D]. 張春蘭.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2003



本文編號：3309627