為了滿足高產(chǎn)奶牛營養(yǎng)需求而飼喂高精料日糧往往容易造成亞急性瘤胃酸中毒（SARA）,使瘤胃pH下降,引起內(nèi)毒素（脂多糖,Lipopolysaccharide,LPS）釋放增加,并導(dǎo)致奶牛泌乳性能下降。表觀遺傳學(xué)是研究在DNA序列不變的情況下,DNA或染色質(zhì)形態(tài)發(fā)生改變引起基因表達(dá)發(fā)生變化的一門科學(xué)。本研究探討了LPS對奶牛乳腺上皮細(xì)胞DNA甲基化和組蛋白乙�；挠绊�,為從表觀遺傳學(xué)角度研究LPS導(dǎo)致的奶牛乳腺細(xì)胞泌乳能力降低的機(jī)制提供參考。試驗一:采用DNA條形碼技術(shù)、免疫組化分析和細(xì)胞生長活性測定試驗對奶牛乳腺上皮細(xì)胞系MAC-T細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞物種、類型和活性鑒定。鑒定結(jié)果顯示,根據(jù)牛線粒體特異基因設(shè)計的引物進(jìn)行擴(kuò)增,產(chǎn)物在NCBI數(shù)據(jù)庫中以BLAST比對的唯一物種為牛;細(xì)胞免疫熒光試驗?zāi)軝z測到角蛋白18和β-酪蛋白的存在,說明該細(xì)胞類型為上皮型和乳腺細(xì)胞;細(xì)胞生長曲線呈S型。結(jié)果表明,該細(xì)胞為牛乳腺上皮細(xì)胞,且生長活性良好,符合試驗研究要求。試驗二:MAC-T細(xì)胞經(jīng)0,1,10,100及1000 EU/mL的LPS處理48小時后,分別采用甲基化DNA免疫共沉淀測序技術(shù)（MeDIP-Se... 

【文章來源】：西南大學(xué)重慶市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

內(nèi)毒素對奶牛泌乳的影響（引自董國忠等，2015）

圖 2-2 染色質(zhì)、核小體、組蛋白、DNA 之間的關(guān)系Figure 2-2 The relationship between chromatin, nucleosome, histone and DNA發(fā)現(xiàn)由 LPS 誘導(dǎo)炎癥基因染色質(zhì)結(jié)構(gòu)變化的證據(jù)是 1999 年的小鼠現(xiàn)由于 LPS 的刺激，巨噬細(xì)胞 IL-12 基因啟動子區(qū)域發(fā)生快速的核而改變了染色質(zhì)形態(tài)，導(dǎo)致 IL-12 的釋放增加[48]。組蛋白去甲基化酶

圖 2-4 MeDIP-Seq 檢測 DNA 甲基化的流程ure 2-4 MeDIP-Seq detection of DNAmethylation pro鹽直接測序法后測序（Bisulfite sequencing PCR, BSP）是 F甲基化的一種方法[67]。其主要原理是利用亞硫

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]DNA條形碼在肉制品摻偽中非定向篩查技術(shù)的研究[J]. 鐘文濤,王芳妹,李白玉,蔣偉,顏亨梅.  食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報. 2017(05)
[2]內(nèi)毒素對豬的危害及其控制[J]. 汪志,董國忠,吳劍波.  動物營養(yǎng)學(xué)報. 2017(02)
[3]質(zhì)譜技術(shù)在DNA甲基化研究中的應(yīng)用[J]. 黃新鳳,葉金波,劉建軍.  生物技術(shù)通報. 2015(11)
[4]DNA甲基化數(shù)據(jù)分析方法和軟件應(yīng)用[J]. 付利娟,夏映曦,何俊琳,劉學(xué)慶,陳雪梅,王應(yīng)雄,丁裕斌.  重慶醫(yī)學(xué). 2012(17)
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[6]DNA條形碼在鑒定物種中的應(yīng)用[J]. 杜啟艷,常重杰.  生物學(xué)教學(xué). 2010(12)
[7]奶牛產(chǎn)后子宮內(nèi)細(xì)菌內(nèi)毒素與子宮內(nèi)膜炎的關(guān)系[J]. 姜彥雨,趙樹臣,侯振中.  現(xiàn)代畜牧獸醫(yī). 2007(11)
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[9]DNA甲基化研究方法的回顧與評價[J]. 顧婷婷,張忠明,鄭鵬生.  中國婦幼健康研究. 2006(06)
[10]DNA甲基化方法研究現(xiàn)狀[J]. 沈佳堯,侯鵬,祭美菊,李松,陸祖宏,何農(nóng)躍.  生命的化學(xué). 2003(02)

博士論文
[1]熱應(yīng)激對奶牛、奶山羊體內(nèi)內(nèi)毒素含量的影響及緩解熱應(yīng)激的營養(yǎng)技術(shù)研究[D]. 王立志.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010

碩士論文
[1]內(nèi)毒素對奶牛乳腺組織免疫活化狀態(tài)及乳脂肪和乳蛋白合成的影響及其控制[D]. 原利榮.西南大學(xué) 2015
[2]不同日糧模式對奶牛瘤胃內(nèi)毒素釋放和乳腺免疫活化狀態(tài)的影響[D]. 周俊.西南大學(xué) 2013



本文編號：3307958