發(fā)布時間：2021-07-27 02:09

　　痘苗病毒天壇株作為疫苗，在我國消滅天花的歷史上居功至偉。近年來，痘苗病毒天壇株作為活病毒載體在預防艾滋病、狂犬病和流感等傳染病方面取得了巨大成就。然而，顱內接種實驗表明，痘苗病毒天壇株對小鼠的致死率較高，具有一定的神經(jīng)毒性。臨床接種痘苗病毒天壇株疫苗也可能導致少數(shù)接種者出現(xiàn)嚴重副作用，例如腦炎、結膜炎、心肌炎及全身性發(fā)痘等。因此，如何構建更加低毒、更加安全且高效的痘苗病毒天壇株疫苗或載體成為研究的熱點。通過同源重組和Cre-LoxP技術，定點敲除痘苗病毒基因組中的復制非必需基因，是構建減毒疫苗或載體的有效方法�；蛑亟M作為基因工程的重要技術之一，包括同源重組、位點特異性重組以及轉座重組。同源重組技術，又叫基因打靶技術，是目前研究痘苗病毒基因功能、構建減毒型痘苗病毒疫苗和載體的主要方法。該技術通過構建含有左右重組臂、啟動子和篩選標記基因的穿梭載體，使病毒基因組與外源DNA序列發(fā)生重組，進而定點修飾或缺失基因組上某一目的基因，構建缺失型痘苗病毒。進而，通過體外和體內實驗對缺失型痘苗病毒的生長動力學、病毒粒子表型、細胞間傳播能力、毒力、宿主范圍和免疫原性等特性進行系統(tǒng)分析。在構建缺失型毒株的... 

【文章來源】：吉林大學吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：190 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

1胞內成熟病毒和胞外包膜病毒超微結構和形態(tài)示意圖

幫助 VACV 逃避宿主特異性抗體和補體的抗病毒作用。5 種不同形態(tài)病毒粒子在侵入和釋放的機制截然不同。IMV 不依賴于 PH 值，圖1.1.2 痘苗病毒侵染宿主細胞過程示意圖Fig1.1.2 Schematic diagram of vaccinia virus infecting host cell.

進行病毒分離，并測定病毒滴度，發(fā)現(xiàn)病毒滴度下降。用缺失型毒株感染 3 d 后，小鼠脾臟、肝臟、腦組織和縱隔淋巴結中，NK 細胞活動明顯增強，對照組沒有變化。缺失型毒株感染后 7 d，小鼠脾臟、肝臟、腦組織和縱隔淋巴結中，針對痘苗病毒特異性的細胞毒性 T 淋巴細胞（cytotoxic T-lymphocyte, CTL）反應明顯增強，小鼠肺洗液和肺細胞中 IFN-γ分泌水平明顯上升。體內和體外實驗均表明，感染 C12L 缺失型毒株后，IL-18 水平提高。因此，當痘苗病毒感染機體后，無論特異性或非特異性免疫反應，由 C12L 編碼的 vIL-18bp 蛋白對 IL-18 具有抑制作用。從另一方面也能說明 IL-18 具有促進 T 細胞分泌 IFN-γ和增強細胞毒性的功能，在消滅入侵機體的病毒過程中具有重要作用。為了研究 VTT 的毒力基因，Dai 等[44]敲除了 VTT 基因組中編碼 IL-18 結合蛋白的 C12L 基因，以及編碼腫瘤壞死因子同系物的 A53R 基因。小鼠實驗表明，敲除 C12L 基因的 VTT 株其顱內接種半數(shù)致死量降低 10 倍。敲除 A53R 基因后，VTT 的顱內接種致死量下降 64.6 倍。通過皮內感染家兔實驗表明，僅敲除 C12L 基因后，基因缺失病毒表現(xiàn)出減毒特性。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]應用Cre/loxP系統(tǒng)構建含人PTEN基因的重組腺病毒載體[J]. 朱自滿,孫念緒,張超,吳淼,劉偉,余佩武.  消化外科. 2005(02)
[2]適用于疫苗株篩選的痘苗病毒載體的構建[J]. 周小云,劉穎,饒力群,王芙,戴凱凡,段丹麗,邵一鳴.  病毒學報. 2004(04)



本文編號：3304849