沙門(mén)氏菌是一種臨床常見(jiàn)且具有多種血清型的食源性革蘭氏陰性病原菌。感染沙門(mén)氏菌后的雞可能會(huì)出現(xiàn)產(chǎn)蛋量減少、腹瀉等一系列的癥狀。其中,被雞白痢沙門(mén)氏菌感染的雞通常會(huì)排出白色的糨糊狀糞便,腹瀉嚴(yán)重時(shí),可導(dǎo)致死亡。腸炎沙門(mén)氏菌為人畜共患病原菌,可導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生發(fā)熱、嘔吐、腹瀉等癥狀。目前,雞群中沙門(mén)氏菌病是我國(guó)養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展面臨的主要威脅之一。本實(shí)驗(yàn)室研究發(fā)現(xiàn),雞群被沙門(mén)氏菌感染時(shí),死胚樣品中沙門(mén)氏菌的檢出率最高。為評(píng)估蘆花雞群中沙門(mén)氏菌的感染狀態(tài),本研究應(yīng)用蘆花雞的18日齡未出殼死胚,完成了沙門(mén)氏菌的分離鑒定,并對(duì)其耐藥性及毒力基因的攜帶情況進(jìn)行了分析。本研究于2019年4月采集蘆花雞雞群中90個(gè)18日齡的未出殼死胚,對(duì)雞胚樣品分別進(jìn)行BPW、TTB增菌培養(yǎng),采用三線法將細(xì)菌接種于XLT4培養(yǎng)基,通過(guò)菌落形態(tài)、聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）鑒定沙門(mén)氏菌;用沙門(mén)氏菌屬診斷血清對(duì)分離菌株進(jìn)行血清分型;通過(guò)多位點(diǎn)序列分型技術(shù)（Multilocus sequence typing,MLST）確定沙門(mén)氏菌基因序列型,了解分離菌株的特點(diǎn)以及菌株間的親緣關(guān)系;采用PCR技術(shù)對(duì)分離菌株進(jìn)行13種常見(jiàn)毒力基因的檢測(cè);采... 

【文章來(lái)源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：72 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

菌株在XLT4培養(yǎng)基上的培養(yǎng)特性

蘆花雞雞胚源沙門(mén)氏菌的分離鑒定及其耐藥與毒力相關(guān)基因分析243試驗(yàn)結(jié)果3.1沙門(mén)氏菌的鑒定結(jié)果3.1.1沙門(mén)氏菌培養(yǎng)特性被檢樣品經(jīng)TTB增菌液培養(yǎng)后劃線接種于XLT4培養(yǎng)基上，在XLT4培養(yǎng)基上生長(zhǎng)出兩種形態(tài)不同的菌落，一種是白色或乳白色、半透明、邊緣整齊、圓形的小菌落（如圖1所示）；另一種是中間為黑色、邊緣整齊、圓形的小菌落（如圖2所示）。圖1菌株在XLT4培養(yǎng)基上的培養(yǎng)特性圖2菌株在XLT4培養(yǎng)基上的培養(yǎng)特性Fig1BacterialstrainintheXLT4mediumFig2BacterialstrainintheXLT4medium3.1.2沙門(mén)氏菌PCR鑒定結(jié)果沙門(mén)菌invA引物凝膠電泳成像結(jié)果如圖3所示：特異性條帶與目的條帶（331bp）相符合。

山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士專(zhuān)業(yè)學(xué)位論文25圖3沙門(mén)菌invA基因擴(kuò)增結(jié)果Fig3PCRamplificationofinvAgene*泳道M為DL2000DNAMarker，泳道1為陰性對(duì)照，泳道2為傷寒沙門(mén)氏菌，泳道3為腸炎沙門(mén)氏菌，泳道4為白痢沙門(mén)氏菌，泳道5-12為疑似沙門(mén)氏菌陽(yáng)性樣本泳道LaneMisDL2000DNAmarker,Lane1isnegativecontrol,Lane2isSalmonellatyphimurium,Lane3isSalmonellaenteritis,Lane4isSalmonellaPullorum,Lane5-12issuspectedSalmonellapositivesampleLane沙門(mén)菌iPAJ引物凝膠電泳成像結(jié)果如圖4所示：特異性條帶與目的條帶（741bp）相符合。圖4沙門(mén)菌iPAJ基因擴(kuò)增結(jié)果Fig4PCRamplificationofiPAJgene*泳道M為DL2000DNAMarker，泳道-為陰性對(duì)照，泳道18為雞白痢沙門(mén)氏菌陽(yáng)性對(duì)照泳道1-17為疑似雞白痢沙門(mén)氏菌陽(yáng)性樣本泳道LaneMisDL2000DNAmarker,Lane-isnegativecontrol,Lane18ispositivecontrolofSalmonellaPullorum,Lane1-17issuspectedpositivesamplelaneofSalmonellaPullorum3.2沙門(mén)氏菌分離結(jié)果本研究從蘆花雞雞場(chǎng)送檢的90個(gè)18日齡未出殼的雞死胚中分離到77株沙門(mén)菌，陽(yáng)性率為85.6%（77/90）。

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號(hào)：3303541