發(fā)布時間：2021-07-24 13:03

　　口蹄疫（FMD）是由口蹄疫病毒（FMDV）引起的一種急性、高度傳染性和可快速遠距離傳播給豬、牛、羊等主要畜種及其他家養(yǎng)或野生的偶蹄類動物的動物疫病。鑒于疫苗接種策略在預防和控制口蹄疫中的關(guān)鍵作用,研制更安全、有效的口蹄疫疫苗已成為當務(wù)之急�；蚬こ瘫砦灰呙缇哂辛己玫陌踩郧铱烧T導體液和細胞免疫應答,是一種潛在的候選疫苗。細菌的鞭毛蛋白是Toll樣受體5（TLR5）識別的病原體相關(guān)分子模式（PAMP）,能夠激活天然先天免疫和適應性免疫應答。越來越多的研究表明,將鞭毛蛋白作為遞呈目的抗原到的載體可顯著提高了抗原的免疫原性和保護效力。這提示人們開發(fā)基于鞭毛蛋白載體的重組蛋白疫苗是一種有前景的替代途徑。本研究將口蹄疫病毒的兩個關(guān)鍵B細胞表位的串聯(lián)重復（2×B1B2）和一個截短的vp1（Δvp1）蛋白以不同的模式分別融合到帶有一個通用型外源性T細胞表位的鞭毛蛋白的C-末端構(gòu)建了三個重組鞭毛融合蛋白。其中,Δvp1和2×B1B2分別與鞭毛蛋白的C端融合而產(chǎn)生FT（FlagellinTruncated VP1）和FME（Flagellin-Multiple Epitopes）,Δvp1取代FME中鞭... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學院北京市

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

基于鞭毛蛋白載體的口蹄疫表位疫苗研究的技術(shù)路線

圖 1.2 細菌鞭毛蛋白參與的三個信號通路(引自 Cui,et al.,Expert Review of Vaccines, 2018)Figure 1.2 Three signaling pathways involved in bacterial flagellinA：巨噬細胞中細菌鞭毛蛋白刺激的 TLR5/TLR4 異源二聚體依賴性信號通路；圖中左側(cè)的藍色的箭頭描述的是巨噬細胞中細菌鞭毛蛋白通過 TLR4/TLR5 異源二聚體刺激產(chǎn)生 NO 合成的信號通路。TLR4/TLR5 復合物為通過 MyD88 非依賴性通路最終表達 IFN-β 提供必要的信號，該過程涉及到 TRIF 或 TIRAP/Mal的激活。TBK1 和 TRAF-6 隨后的激活導致信號反應的級聯(lián)放大作用，這使得 IFN-β 分別通過 IRF3 和 AP-1 兩種途徑誘導產(chǎn)生。細胞外 IFN-β 和膜受體的結(jié)合誘導 JAK 的活化。然后，stat-1 被 JAK 磷酸化。Stat 的激活最終誘導 iNOS的表達和 NO 的產(chǎn)生。B：胞外鞭毛蛋白誘導的 TLR5 依賴性 NF-κB 信號通路；圖中中間紅色箭頭描述的是胞外鞭毛蛋白誘導的 TLR5 依賴性 NF-κ B 信號通路。細菌鞭毛蛋白與細胞表面受體 TLR5的結(jié)合誘導 TLR5 的二聚體化。然后，MyD88 被招募并與 TLR5 的胞質(zhì)部分相結(jié)合，該過程導致隨后的 IRAK4、 IRAK1、TRAF6、TAK1、 IKK 以及最終 Iκ B 激酶的激活。Iκ B 激酶的激活有助于 NF-κ B 的核定位，這將誘導許多下游炎癥相關(guān)基因表達。這些激活基因分泌的各種炎癥因子和趨化因子直接或間接參與隨后的適應性的免疫反應。C：胞內(nèi)鞭毛蛋白誘導的 NLRC4/NaIP5 依賴性炎性小體信號通路；圖中右側(cè)黑色箭頭描述的是胞內(nèi)鞭毛蛋白誘導的NLRC4/NAIP5 依賴性炎性小體信號通路。胞內(nèi)鞭毛蛋白與NLRC4/NAIP5受體的相互作用導致異源寡聚和通過NLRC4的CARD或者在炎癥復合物形成過程中與炎性小體結(jié)合的銜接蛋白ASC招募

意圖如圖2-1所示，鼠傷寒沙門氏菌鞭毛蛋白的三維結(jié)構(gòu)位與鞭毛蛋白融合基因的重組體其構(gòu)建策略如圖 2-3 所表 2.1 構(gòu)建重組融合蛋白的序列Table 2.1 Construction of recombinant fusion proteins表位/載體 注釋VRGDLQVLAQK VP1(ASN133-PHE163) B1 表位; (G–H 環(huán)RHKQKIVAPAKQ VP1（ALA198-GLN211） B2 表位; (C-末端VRGDLQVLAQKAIKATRVTELLYPLLAVHPSAARHVP1(ASN133-GLN211) ΔVP1 epitope (截TEL 破傷風類毒素 CD4+T 細胞表位 P2 (TT-P2)通用型 T 細胞表TQNNLNK…LSLLR鞭毛蛋白 (ALA2-ARG506) 載體; 鼠傷寒沙GGGS Linker （連接子） (GGGGS)3;長的Linker （連接子） PG ; 短的柔性肽His tag pET24a(+) 載體


本文編號：3300701