豬增生性腸炎以患豬回腸和結(jié)腸隱窩內(nèi)未成熟的腸腺上皮細(xì)胞發(fā)生腺瘤樣的增生、腸黏膜上皮細(xì)胞異常增多和腸管增厚為特征,可伴發(fā)腹瀉。急性型較少,多見(jiàn)慢性型和亞臨床型,常常在屠宰時(shí)才發(fā)現(xiàn),最明顯的特征就是患豬生長(zhǎng)遲緩,體重較正常豬要輕得多。胞內(nèi)勞森菌是該病的致病菌,在形態(tài)上與彎曲菌相似,菌體呈桿狀,兩端尖銳或者鈍圓,長(zhǎng)度約1.25¹.75μm,寬度約0.25⁰.43μm,具有三層外膜,革蘭氏染色陰性。該菌的培養(yǎng)條件十分苛刻,在目前所有在用的培養(yǎng)基包括雞胚均不能生長(zhǎng),只能用特殊的腸細(xì)胞系來(lái)進(jìn)行培養(yǎng),比如鼠腸上皮細(xì)胞IEC-18、豬腸上皮細(xì)胞IPEC-J2和小鼠成纖維細(xì)胞McCoy,或者使用分離自宿主的腸道原代細(xì)胞。感染該菌的細(xì)胞不見(jiàn)明顯的病變,因此難以直觀地觀察到該菌的感染。更苛刻的條件是需要保持培養(yǎng)環(huán)境8%的低氧狀態(tài),絕對(duì)無(wú)氧和正常供氧都不利于該菌的生長(zhǎng)。胞內(nèi)勞森菌是一種對(duì)抗生素敏感的細(xì)菌,日常養(yǎng)殖時(shí)使用藥物預(yù)防便可抑制該菌生長(zhǎng)繁殖,達(dá)到預(yù)防該病的效果�，F(xiàn)在國(guó)際上因食品安全等原因推崇無(wú)抗養(yǎng)殖模式,國(guó)內(nèi)也大力推行無(wú)抗養(yǎng)殖,目前雖有市售疫苗,但很少被應(yīng)用。... 

【文章來(lái)源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：55 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

胞內(nèi)勞森菌研究的重要要里程事件Fig1-1.ImportantmilestonesinthestudyofLawsoniaintracellularis

泰安及周邊地區(qū)豬增生性腸炎感染情況調(diào)查和胞內(nèi)勞森菌培養(yǎng)方法建立6圖1-2.胞內(nèi)勞森菌感染腸上皮細(xì)胞的模式圖Fig1-2.PatternofLawsoniaintracellularisinfectionofintestinalepithelialcells胞內(nèi)勞森氏菌是在細(xì)胞內(nèi)增殖的，以二分裂的形式進(jìn)行復(fù)制并在細(xì)胞間擴(kuò)散(DriemeierD.etal.,2002)。細(xì)胞增生僅限于被細(xì)菌感染的細(xì)胞，并且細(xì)胞增生區(qū)位于正常上皮之間，感染后的細(xì)胞呈現(xiàn)高速率分裂，有絲分裂加強(qiáng)，細(xì)胞數(shù)目可增加至正常細(xì)胞數(shù)倍之多。當(dāng)病變發(fā)展嚴(yán)重時(shí)，細(xì)胞受細(xì)菌刺激而高速增殖則不再持續(xù)。有研究發(fā)現(xiàn)與未感染胞內(nèi)勞森氏菌的腸上皮細(xì)胞相比，感染細(xì)胞的G1期相關(guān)基因（RhoA、RhoB和RhoGTPase）轉(zhuǎn)錄、蛋白合成均被明顯激活。細(xì)胞周期G1期的mRNA轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)的合成非常活躍，用以準(zhǔn)備宿主細(xì)胞的后續(xù)分裂。Notch信號(hào)通路和Wnt/β-連環(huán)蛋白通路也可能與未成熟隱窩上皮細(xì)胞增殖有關(guān)(BengtssonR.J.etal,2017)。另外，在感染的細(xì)胞中與營(yíng)養(yǎng)獲取相關(guān)的基因表達(dá)下調(diào)，導(dǎo)致腸道內(nèi)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)攝取不足，這可能是導(dǎo)致腹瀉的原因之一(OhYS.etal.,2010；JacobsonM.etal.,2011；SmithSH.etal.,2014;VannucciFA.etal.,2013)。1.5豬增生性腸炎的診斷與檢測(cè)初步的診斷主要依據(jù)流行病學(xué)、臨床癥狀和眼觀病變，但是很難與其他腸道疾病進(jìn)行區(qū)分，不能確診。在初步診斷的基礎(chǔ)上，可以通過(guò)病理組織學(xué)、細(xì)菌學(xué)、血清學(xué)和分子生物學(xué)檢測(cè)等技術(shù)手段來(lái)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷。1.5.1病理組織學(xué)檢查病理組織學(xué)檢查較為簡(jiǎn)單，HE染色可以看到由病菌感染造成的組織增生和組織損傷，但是對(duì)細(xì)菌檢測(cè)的敏感性較低，特別是鏡檢沒(méi)有發(fā)現(xiàn)黏膜增生的病例。而取病變組織做切片，用WS鍍銀法染色；或取病變黏膜做抹片，用改良的Ziehl-Neelsen法染色可以觀察到腸腺細(xì)胞內(nèi)是否有胞內(nèi)寄生菌的存

泰安及周邊地區(qū)豬增生性腸炎感染情況調(diào)查和胞內(nèi)勞森菌培養(yǎng)方法建立14取相應(yīng)數(shù)量的樣本，屠宰場(chǎng)的生豬來(lái)源主要是魯中及魯西的部分地市，所有腸道樣本均來(lái)自正常月齡屠宰生豬。為盡量避免樣品來(lái)源過(guò)于集中，采樣時(shí)間通常間隔數(shù)日。對(duì)采集來(lái)的腸道樣品進(jìn)行清洗、稱(chēng)重、研磨與核酸提取處理，并分別統(tǒng)計(jì)各個(gè)樣品的來(lái)源地。對(duì)PCR檢測(cè)陽(yáng)性的樣本要觀察并記錄小腸的腸壁增生情況及內(nèi)容物情況，用PBS沖洗小腸內(nèi)壁，將其浸泡在4%的甲醛溶液中固定，用于做組織病理學(xué)檢測(cè)。糞便樣本的采集同樣采用隨機(jī)抽取的方法，在每個(gè)采樣地區(qū)選擇3家互不臨近的養(yǎng)殖場(chǎng)，在每個(gè)圈舍內(nèi)隨機(jī)采取4頭豬的肛門(mén)拭子進(jìn)行核酸提取處理，所有糞便樣本均來(lái)自生長(zhǎng)育肥豬,兩種樣本的覆蓋地區(qū)見(jiàn)圖2-1。圖2-1.樣品采集覆蓋區(qū)域Figure2-1.Samplecoverage2.2.1.2常規(guī)PCR引物設(shè)計(jì)根據(jù)GenBank上已公布的胞內(nèi)勞森氏菌全序列（登錄號(hào)：AM180252），在aspA基因保守區(qū)靶點(diǎn)上設(shè)計(jì)一對(duì)特異性引物，片段大小為319bp，序列信息見(jiàn)表2-5,交由上海生工生物合成。2.2.1.3豬腸道組織DNA提取采用市售的組織基因組DNA提取Kit，攜帶的胞內(nèi)勞森菌基因組DNA可同時(shí)提取，步驟如下：（1）將每份腸管分別切成碎塊放入已滅菌的提前加入無(wú)菌PBS的2ml預(yù)冷離心管中，再放入酒精浸泡滅菌后預(yù)冷的5mm不銹鋼研磨珠，用研磨機(jī)研磨2min，此時(shí)已無(wú)大組織塊;（2）將上述離心管置于高速離心機(jī)內(nèi),9000rmp離心2min使組織沉淀；（3）取50mg左右沉淀的組織碎塊，放入2ml的PE離心管；：腸道樣本：糞便樣本

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]豬增生性腸炎診斷技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 鄭新添,楊小燕.  中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2011(04)
[2]豬增生性腸炎的致病機(jī)理及流行病學(xué)最新進(jìn)展[J]. 李龍.  養(yǎng)豬. 2011(02)
[3]豬增生性腸炎的病原特性研究進(jìn)展[J]. 劉佩紅,王建,張維誼.  上海畜牧獸醫(yī)通訊. 2005(01)
[4]豬增生性腸炎研究進(jìn)展[J]. 俞道進(jìn).  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2001(03)

碩士論文
[1]豬胞內(nèi)勞森菌檢測(cè)方法的建立及其培養(yǎng)方法的初探[D]. 田城.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012



本文編號(hào)：3298974