為了探索對(duì)于豬不同時(shí)期卵母細(xì)胞毒性最低,冷凍效果最佳的冷凍保護(hù)液配方,尋找最適合豬不同時(shí)期卵母細(xì)胞的冷凍方法,分析豬不同時(shí)期卵母細(xì)胞凍后發(fā)育能力降低的影響因素,從而為成功冷凍豬卵母細(xì)胞能應(yīng)用于生產(chǎn)實(shí)際提供理論支持。因此本研究以GV期和MⅡ期卵母細(xì)胞作為試驗(yàn)材料,應(yīng)用玻璃化冷凍方法,就目前應(yīng)用最多的七種冷凍保護(hù)液配方進(jìn)行篩選,比較三種不同冷凍載體冷凍卵母細(xì)胞的效果差異,并通過(guò)透射電鏡方法觀察卵母細(xì)胞冷凍前后的超微結(jié)構(gòu)變化,采用彗星電泳方法分析冷凍對(duì)卵母細(xì)胞造成的DNA損傷情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：1.七組冷凍保護(hù)液對(duì)MⅡ期卵母細(xì)胞有低毒性作用,各組分裂率、囊胚率、囊胚細(xì)胞數(shù)均低于對(duì)照組,5組的分裂率與對(duì)照組差異顯著（P<0.05）,1組的囊胚率與對(duì)照組差異顯著（P<0.05）。其余各組間分裂率和囊胚率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。綜合各組指標(biāo)選取3組、6組和7組為對(duì)豬MⅡ期卵母細(xì)胞的發(fā)育能力損傷最小的前三組冷凍保護(hù)液,應(yīng)用GMP管對(duì)其冷凍保護(hù)效果進(jìn)行比較,發(fā)現(xiàn)乙二醇單獨(dú)使用或者乙二醇和二甲基亞砜混合使用都是適合MⅡ期卵母細(xì)胞玻璃化冷凍的保護(hù)劑配方。綜合考慮,選取HM+7.5%（DMSO+EG）,HM+... 

【文章來(lái)源】：廣西大學(xué)廣西壯族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：60 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
目錄
第一章 卵母細(xì)胞凍存研究概況
    1 卵母細(xì)胞冷凍保存的意義及概況
    2 低溫冷凍的原理及損傷機(jī)理
    3 玻璃化冷凍保護(hù)劑
        3.1 滲透性保護(hù)劑
        3.2 非滲透性保護(hù)劑
        3.3 抗凍蛋白
        3.4 納米顆粒
        3.5 新型抗凍保護(hù)劑
    4 卵母細(xì)胞玻璃化冷凍保存方法及其影響
        4.1 開(kāi)放式拉長(zhǎng)麥管法(Open pulled straw,OPS)
        4.2 半麥管法(Hemi-straw)
        4.3 毛細(xì)玻璃法(GMP)
        4.4 電鏡銅網(wǎng)法(electron microscopic grids)
        4.5 冷凍環(huán)玻璃化法(Cryo-loop Vitrification,CLV)
        4.6 固體表面冷凍法(Solid-Surface vitrification,SSV)
        4.7 微滴法(Microdroplet,MDS)
    5 冷凍對(duì)卵母細(xì)胞的影響及損傷檢測(cè)方法
        5.1 對(duì)超微結(jié)構(gòu)的影響
        5.2 對(duì)細(xì)胞骨架的影響
        5.3 對(duì)透明帶的影響
        5.4 對(duì)DNA的影響
第二章 玻璃化冷凍保護(hù)液對(duì)不同時(shí)期卵母細(xì)胞發(fā)育能力的影響
    1 材料與方法
        1.1 試驗(yàn)材料
        1.2 試驗(yàn)方法
        1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
        1.4 數(shù)據(jù)分析
    2 結(jié)果
        2.1 冷凍保護(hù)液對(duì)豬GV期、MⅡ期卵母細(xì)胞發(fā)育能力的影響
        2.2 三種冷凍保護(hù)液對(duì)玻璃化冷凍GV期、MⅡ期卵母細(xì)胞發(fā)育能力的影響
        2.3 三種冷凍載體對(duì)GV期、MⅡ期卵母細(xì)胞冷凍效果的影響
    3 討論
第三章 冷凍前后GV期及MⅡ期卵母細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)觀察
    1 材料與方法
        1.1 試驗(yàn)材料
        1.2 試驗(yàn)方法
        1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
    2 結(jié)果
        2.1 GV期卵母細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)觀察
        2.2 MⅡ期卵母細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)觀察
        2.3 玻璃化冷凍后GV期卵母細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化
        2.4 玻璃化冷凍后MⅡ期卵母細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化
    3 討論
第四章 玻璃化冷凍對(duì)卵母細(xì)胞DNA的影響
    1 材料和方法
        1.1 試驗(yàn)材料
        1.2 試驗(yàn)方法
        1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
        1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    2 結(jié)果
        2.1 玻璃化冷凍對(duì)GV期卵母細(xì)胞DNA損傷的檢測(cè)
        2.2 玻璃化冷凍對(duì)MⅡ期卵母細(xì)胞DNA損傷的檢測(cè)
    3 討論
第五章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
圖片與說(shuō)明
致謝
作者簡(jiǎn)介
攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況


【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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[7]豬體外生產(chǎn)胚胎玻璃化冷凍保存的研究[D]. 葛立軍.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007
[8]豬卵母細(xì)胞玻璃化冷凍及體外成熟的研究[D]. 黃晶.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2007
[9]牛早期卵母細(xì)胞和成熟前后的超微結(jié)構(gòu)變化[D]. 邱志芳.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006
[10]彗星試驗(yàn)方法的初步研究[D]. 楊紅蓮.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué) 2004



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