后口動(dòng)物肝臟具有強(qiáng)大的再生能力,肝臟部分切除后雖不能恢復(fù)成原本的形態(tài),但其質(zhì)量經(jīng)代償生長可達(dá)到術(shù)前相仿的水平。傷口完整修復(fù)且不留疤也是肝臟切除或移植手術(shù)后肝臟再生的重要特征。先前大量研究結(jié)果顯示多條信號(hào)通路參與調(diào)控再生中激活肝細(xì)胞重新增殖的過程,然而有關(guān)調(diào)控術(shù)后肝臟切口處無疤修復(fù)的分子機(jī)制目前鮮有報(bào)道。消化器官生長因子（Digestive-organ-expansion-factor, Def）是一個(gè)核仁蛋白,最近研究結(jié)果表明該蛋白與Calpain3形成復(fù)合物,能夠介導(dǎo)核仁內(nèi)p53蛋白的降解�；诔赡臧唏R魚肝臟在部分肝臟切除后兩周內(nèi)能夠再生這一實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?我們?cè)噲D探索Def-Capn3-p53該通路在斑馬魚肝臟再生中的作用。首先,我們發(fā)現(xiàn)正常情況下成年defhi429/+突變體肝臟中Def的表達(dá)量只有野生型的1/4。其次,成年野生型斑馬魚術(shù)后肝臟中Def表達(dá)量明顯增加,表明Def蛋白可能在斑馬魚肝臟再生中具有一定的作用,盡管defhi429/+突變體術(shù)后肝臟中Def表達(dá)量也有所增加,但增加量遠(yuǎn)低于野生型。隨后,我們比較了野生型和defhi429/+突變體術(shù)后肝臟的再生情況,發(fā)現(xiàn)盡管def... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：118 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
第一章 前言
    1.1 哺乳動(dòng)物肝臟再生的生物學(xué)特征
    1.2 哺乳動(dòng)物肝臟再生與信號(hào)通路
        1.2.1 啟動(dòng)階段
        1.2.2 增殖階段
        1.2.3 終止階段
    1.3 斑馬魚的肝臟結(jié)構(gòu)與功能
    1.4 斑馬魚肝臟再生及其研究進(jìn)展
    1.5 基因def及其研究進(jìn)展
    1.6 本研究的內(nèi)容、目的與意義
第二章 材料與方法
    2.1 斑馬魚品系及飼養(yǎng)
    2.2 常規(guī)生化試劑及配方
    2.3 DNA相關(guān)實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 基因的克隆
        2.3.2 DNA測(cè)序
        2.3.3 PCR鑒定轉(zhuǎn)基因魚及突變體
    2.4 RNA相關(guān)實(shí)驗(yàn)方法
        2.4.1 總RNA的提取
        2.4.2 總RNA中基因組DNA的消化
        2.4.3 兩步法RT-PCR
        2.4.4 Northern雜交
        2.4.5 轉(zhuǎn)錄組RNA測(cè)序(RNA seq)
    2.5 蛋白質(zhì)相關(guān)實(shí)驗(yàn)方法
        2.5.1 mu-Leg1多抗制備
        2.5.2 蛋白質(zhì)免疫印跡雜交(Western Blotting)
        2.5.3 抗體免疫熒光染色
    2.6 組織原位雜交相關(guān)實(shí)驗(yàn)方法
        2.6.1 肝臟組織切片的制備
        2.6.2 Masson染色
        2.6.3 HE染色
        2.6.4 PAS染色
        2.6.5 EdU(5-乙炔基-2’-脫氧尿苷)的標(biāo)記及檢測(cè)
    2.7 斑馬魚的操作
        2.7.1 肝臟部分切除手術(shù)(Partial Hepatectomy,PH)
        2.7.2 肝重/體重比值(Liver-to-Body Ratio,LBR)的測(cè)量
        2.7.3 小分子藥物的處理
    2.8 斑馬魚顯微注射
    2.9 mu-leg1基因條件性剔除小鼠模型的建立
    2.10 Western強(qiáng)度及熒光強(qiáng)度的定量
    2.11 本研究涉及的列表
第三章 def~(hi429/+)突變體部分肝臟切除后切口處再生缺陷
    3.1 def~(hi429/+)成年斑馬魚肝臟中Def單倍劑量表達(dá)不足
    3.2 def~(hi429/+)突變體部分肝臟切除后切口處再生缺陷
    3.3 def~(hi429/+)突變體部分肝臟切除后LBR值和肝組織結(jié)構(gòu)未顯異常
第四章 def~(hi429/+)突變體部分肝臟切除后傷口形成疤痕
    4.1 def~(hi429/+)突變體術(shù)后早期細(xì)胞增殖或凋亡無異常
    4.2 def~(hi429/+)突變體術(shù)后肝臟傷口無法正常重塑
    4.3 def~(hi429/+)突變體術(shù)后傷口纖維化
第五章 def~(hi429/+)突變體術(shù)后傷口處結(jié)疤與異常的炎癥反應(yīng)有關(guān)
    5.1 def~(hi429/+)突變體術(shù)后肝臟切口處TGFβ信號(hào)異常
    5.2 def~(hi429/+)突變體肝臟傷口處膠原蛋白沉積與活性氧化物信號(hào)無關(guān)
    5.3 def~(hi429/+)突變體肝臟術(shù)后傷口處TGFβ信號(hào)異常源于過度的炎癥反應(yīng)
    5.4 def~(hi429/+)突變體肝臟內(nèi)促炎癥因子異常表達(dá)
    5.5 def~(hi429/+)突變體肝臟術(shù)后炎癥細(xì)胞行為紊亂
第六章 def~(hi429/+)突變體術(shù)后切口處結(jié)疤依賴于Def-p53信號(hào)通路
    6.1 def~(hi429/+)突變體術(shù)后結(jié)疤源于肝細(xì)胞中Def單倍劑量表達(dá)不足
    6.2 def~(hi429/+)突變體術(shù)后切口結(jié)疤依賴于p53信號(hào)通路的持續(xù)激活
第七章 def~(hi429/+)突變體術(shù)后結(jié)疤與HMGB1表達(dá)上調(diào)有關(guān)
    7.1 def~(hi429/+)突變體肝臟中HMGB1表達(dá)上調(diào)
    7.2 def~(hi429/+)突變體術(shù)后傷疤的形成依賴于HMGB1
第八章 肝臟再生細(xì)胞的來源
    8.1 斑馬魚部分肝臟切除后切口處再生肝細(xì)胞具有肝前體細(xì)胞特性
    8.2 斑馬魚部分肝臟切除后非切口處再生肝細(xì)胞的來源
    8.3 Tg(fabp10a:CreER~(T2)轉(zhuǎn)基因斑馬魚的構(gòu)建及表達(dá)分析
第九章 斑馬MJegl復(fù)系同源基因在小鼠中的表達(dá)譜分析及mu-legl基因敲除
    9.1 小鼠mu-leg1基因克隆與序列分析
    9.2 基因mu-leg1組織表達(dá)譜分析
    9.3 mu-Leg1多抗的制備
    9.4 mu-Leg1組織表達(dá)譜分析
    9.5 mu-leg1基因條件性剔除小鼠模型的建立
第十章 結(jié)論與討論
    10.1 結(jié)論
    10.2 討論
參考文獻(xiàn)
作者簡介
致謝



本文編號(hào)：3298250