狂犬病是由狂犬病毒引起的一種急性人畜共患病，狂犬病毒（rabies virus，RV）屬于彈狀病毒科狂犬病毒屬，是一種嗜神經(jīng)病毒，感染后病死率接近100%，狂犬病毒基質(zhì)蛋白是狂犬病毒的組成部分之一，主要功能是參與病毒的裝配、出芽，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，抑制宿主基因表達(dá)等，說明其在狂犬病毒感染循環(huán)過程中發(fā)揮著及其重要的作用，但是對(duì)該蛋白與宿主相互作用的分子機(jī)制還知之甚少。酵母雙雜交系統(tǒng)（Yeast two-hybrid system）是研究蛋白相互作用和功能、篩選新蛋白的重要工具。為了研究狂犬病病毒基質(zhì)蛋白與宿主相互作用的蛋白，我們首先通過PCR方法獲得CVS11-M基因，然后構(gòu)建酵母表達(dá)載體pGBKT7-CVS11-M，用醋酸鋰法將構(gòu)建好的pGBKT7-CVS11-M與人腦cDNA文庫轉(zhuǎn)入Y2HGold酵母感受態(tài)細(xì)胞中，通過營養(yǎng)缺陷培養(yǎng)篩選陽性克隆，對(duì)陽性克隆進(jìn)行酶切鑒定、回轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)等進(jìn)一步驗(yàn)證，借住BLAST工具對(duì)篩選出的陽性克隆測序結(jié)果進(jìn)行同源性分析，最后確定四種相互作用的蛋白，包括Homo sapiens prolyl4-hydroxylase, alphapolypeptide II （... 

【文章來源】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)吉林省

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
第一篇 文獻(xiàn)綜述
    第一章 酵母雙雜交系統(tǒng)簡介
        1.1 酵母雙雜交系統(tǒng)的基本原理
        1.2 酵母雙雜交系統(tǒng)的優(yōu)缺點(diǎn)
        1.3 酵母雙雜交系統(tǒng)的發(fā)展及應(yīng)用
    第二章 狂犬病病毒 M 蛋白簡介
        2.1 M 蛋白概述
        2.2 M 蛋白作用
    第三章 宿主蛋白 HAX-1 研究進(jìn)展
        3.1 HAX-1 蛋白概述
        3.2 HAX-1 蛋白與疾病的關(guān)系
第二篇 研究內(nèi)容
    第一章 酵母雙雜交篩選與狂犬病病毒 M 蛋白相互作用的蛋白
        1.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        1.3 實(shí)驗(yàn)方法
        1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1.5 討論
        1.6 小結(jié)
    第二章 GST 沉淀（pull-down）實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證 M 蛋白與 HAX-1 蛋白的體外相互作用
        2.1 材料
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.4 討論
        2.5 小結(jié)
    第三章 免疫共沉淀驗(yàn)證 M 蛋白與 HAX-1 蛋白的體內(nèi)相互作用
        3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.4 討論
        3.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡介
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]基于內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)提高重組NDV表達(dá)IBDV VP2基因的研究[J]. 何金嬌,劉雪瑩,吳云舟,郭茉,韓曉輝,尹杰超,安瑩,任桂萍,李德山.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2013(06)
[2]狂犬病病毒BD-06株基質(zhì)蛋白的原核表達(dá)、純化及其多克隆抗體的制備[J]. 趙雪超,張學(xué)煒,張守峰,劉曄,米立娟,扈榮良.  中國畜牧獸醫(yī). 2013(04)
[3]狂犬病病毒基質(zhì)蛋白的原核表達(dá)及其間接ELISA方法的建立[J]. 宮苗苗,曾妮,程朝飛,李剛.  中國人獸共患病學(xué)報(bào). 2013(01)
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[5]低pH胃蛋白酶-甲苯消化法滅活破傷風(fēng)免疫血漿中脂包膜病毒效果驗(yàn)證[J]. 王劍鋒,英志芳,李長貴.  中國生物制品學(xué)雜志. 2012(09)
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[10]狂犬病毒HEP-Flury株基質(zhì)蛋白的原核表達(dá)及純化[J]. 江飆,鄭佳琳,鄺貞結(jié),梁紅茹,徐蕙,郭霄峰.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2010(05)

碩士論文
[1]盤基網(wǎng)柄菌多細(xì)胞發(fā)育期間與gp150蛋白相互作用蛋白的研究[D]. 王大磊.華東師范大學(xué) 2010
[2]NLS-RARα相互作用蛋白的篩選與驗(yàn)證[D]. 王東生.重慶醫(yī)科大學(xué) 2008
[3]應(yīng)用SELDI-TOF質(zhì)譜技術(shù)篩選直腸癌病人血清中特異性生物標(biāo)志物[D]. 韋涌濤.青島大學(xué) 2007
[4]酵母雙雜交技術(shù)篩選與p53蛋白相互作用的蛋白質(zhì)研究[D]. 蘇桂英.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006



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