血吸蟲病是由血吸蟲感染引起的、危害嚴重的人畜共患寄生蟲病,在78個熱帶和亞熱帶國家或地區(qū)流行。在我國流行的是日本血吸蟲病,幾十年來我國血吸蟲病防控取得舉世矚目的成就,大多數(shù)地區(qū)人、畜血吸蟲病的流行已呈現(xiàn)低流行性和低感染特點,傳統(tǒng)的病原學診斷逐漸無法滿足現(xiàn)場需求。本研究的目的是建立一種敏感性高、特異性強、便于判斷的日本血吸蟲病核酸診斷方法。在前期研究及生物信息學分析的基礎上,本文選擇G01、F11、E12、H12、G1/3、G7-1、G7-2和G7-3作為候選基因,分別設計引物并以日本血吸蟲蟲體基因組DNA、BALB/c小鼠基因組DNA和新西蘭大白兔基因組DNA為模板進行基因擴增,挑選出能特異性從日本血吸蟲蟲體基因組DNA擴增,但不能從BALB/c小鼠和新西蘭大白兔基因組DNA擴增出目的片段的基因。以G01作為診斷靶基因,三個不同感染劑量（10條、40條、100條）的小鼠各10只,在感染后42d提取血漿提核酸為模板,均可擴增得到G01片段。同時以弓形蟲、大片形吸蟲、前后盤吸蟲、住肉孢子蟲、旋毛蟲、棘球絳蟲的蟲體基因組DNA為模板對G01進行擴增,均未擴增出目的片段,表明G01基因是一種有... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學院北京市

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

以蟲體基因組DNA為模板對候選基因的篩選結果

圖 2-1 以蟲體基因組 DNA 為模板對候選基因的篩選結果 Fig. 2-1 Screening results of candidate genes by using S. japonicum DNA as template 1 基因 G01；2 基因 F11；3 基因 E12；4 基因 H12；5 基因 G1/3；6 基因 G7-1；7 基因 G7-2；8 基因 G7-3；Y 無引物體系；M DNA分子質(zhì)量標準(DL 500) 1 Gene G01; 2 Gene F11; 3 Gene E12; 4 Gene H12; 5 Gene G1/3; 6 Gene G7-1; 7 Gene G7-2; 8 Gene G7-3; Y No primers control; M DL 500 DNA Marker

中國農(nóng)業(yè)科學院碩士學位論文第二章日本血吸蟲病核酸診斷目的基因的篩選16圖2-3候選基因G01的評估結果Fig.2-3EvaluationofcandidategeneG011-2小鼠陰性血漿DNA；3-4組1小鼠血漿DNA；5-6組2小鼠血漿DNA；7-8組3鼠血漿DNA；P日本血吸蟲蟲體基因組；Y無引物體系；B無模板體系；MDNA分子質(zhì)量標準(DL500)1-2Negativecontrol;3-4DNAfrommiceinGroup1;5-6DNAfrommiceinGroup2;7-8DNAfrommiceinGroup3;PPositivecontrol;YNoprimerscontrol;BNotemplatecontrol;MDL500DNAMarker圖2-4交叉反應性試驗結果Fig.2-4Resultsofcrossreactivitytest1弓形蟲DNA；2大片形吸蟲DNA；3前后盤吸蟲DNA；4住肉孢子蟲DNA；5旋毛蟲DNA；6棘球絳蟲DNA；7日本血吸蟲DNA；MDNA分子質(zhì)量標準(DL500)1DNAofToxoplasmaGondii;2DNAofFasciolagigantica;3DNAofParamphistomum;4DNAofSarcocystiscruzi;5DNAofTrichina;6DNAofEchinococcusmultilocularis;7DNAofSchistosomajaponicum;MDL500DNAMarker2.5討論血吸蟲病的診斷是血吸蟲病防治工作的重要環(huán)節(jié)。近年來，隨著我國采取血吸蟲病有效的防治措施，日本血吸蟲病在人群中的感染率和感染強度均顯著降低(李林瀚等,2019)。但是，目前常用的檢測血吸蟲病的病原學診斷和免疫學診斷方法的敏感性和實效性受到了一定的限制(孫成松等,2013)。然而，分子生物學技術因其高特異性和高靈敏性等特點，極大地促進了低感染強度下血吸蟲病的檢出率(張燕等,2017)。目前相關分子檢測技術除了檢測日本血吸蟲蟲體核酸和蟲卵核酸外，還有檢測水體中的尾蚴核酸，檢測陽性釘螺中的胞蚴核酸等，因此靶基因的選擇也多

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3292571