本文關(guān)鍵詞：NEFAs通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)奶牛肝細胞胰島素抵抗的信號機制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：在奶牛過渡期,由于干物質(zhì)攝入減少及能量需求增加導(dǎo)致奶牛處于能量負平衡(energy negative balance,NEB)狀態(tài),從而誘導(dǎo)體脂動員,使大量的非酯化脂肪酸(non-esterified fatty acids,NEFAs)進入血液,導(dǎo)致高NEFAs血癥。高濃度NEFAs是誘發(fā)奶牛脂肪肝、酮病及炎性疾病的重要因素。研究表明,過渡期NEB奶牛肝臟存在不同程度的胰島素抵抗,但其發(fā)生機制還不明確。近年來的研究顯示,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(endoplasmic reticulum stress,ERS)與胰島素抵抗的發(fā)生密切相關(guān)。然而,關(guān)于NEB奶牛高NEFAs血癥、ERS和肝臟胰島素抵抗之間的關(guān)系及其誘發(fā)機制尚未明確。因此,本實驗通過嚴(yán)重NEB奶牛體內(nèi)實驗及體外培養(yǎng)犢牛肝細胞實驗探討高濃度NEFAs引發(fā)NEB奶牛肝臟胰島素抵抗的機制。測定了NEB奶牛和健康奶牛血液中NEFAs、BHBA、糖代謝指標(biāo)、肝臟損傷指標(biāo),結(jié)果表明NEB奶牛存在嚴(yán)重的能量代謝障礙,胰島素抵抗及肝臟損傷。測定了NEB奶牛肝臟中ERS及胰島素信號關(guān)鍵分子。與健康奶牛相比,PERK、IRE1α的磷酸化水平及cleaved-ATF6的表達水平顯著升高,IRS1(Ser307)磷酸化水平顯著升高,AKT(S473)和GSK3β(Ser9)的磷酸化水平顯著降低。結(jié)果表明,NEB奶牛肝臟中存在ERS及胰島素抵抗。為了探究NEFAs對犢牛原代肝細胞ERS的影響,添加NEFAs(1.2 m M)處理肝細胞不同時間,檢測ERS主要分子的活化及下游分子的表達情況。結(jié)果表明,隨著NEFAs處理時間的增加,ERS的主要分子PERK、IRE1α、cleaved-ATF6被激活并呈時間依賴型增加,ERS下游分子ATF4、P58IPK、ATF6、XBP-1S的m RNA表達水平也呈上升趨勢。通過添加不同濃度的NEFAs(0、0.6、1.2和2.4m M)及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激抑制劑(TUDCA),檢測ERS主要分子的活化及下游分子的表達情況。結(jié)果表明NEFAs可誘導(dǎo)肝細胞發(fā)生ERS,且TUDCA可緩解NEFAs誘導(dǎo)的ERS。透射電鏡結(jié)果顯示NEFAs處理的肝細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔擴張膨脹。利用不同濃度的NEFAs和TUDCA處理肝細胞,隨后用胰島素處理,檢測胰島素信號主要分子IRS1、AKT、GSK3β的活化情況及下游分子PEPCK和G6-pase的m RNA的表達情況。結(jié)果顯示NEFAs可誘導(dǎo)肝細胞產(chǎn)生胰島素抵抗,并且TUDCA可緩解NEFAs誘導(dǎo)的胰島素抵抗,這表明了ERS參與NEFAs誘導(dǎo)犢牛原代肝細胞胰島素抵抗。利用小RNA(sh IRE1α)干擾IRE1α通路、GSK2656157抑制PERK通路、AEBSF抑制ATF6通路,檢測IRE1α、PERK、ATF6通路(ERS三條通路)在NEFAs誘導(dǎo)犢牛原代肝細胞胰島素抵抗中的作用。結(jié)果顯示,干擾IRE1α及抑制PERK通路可顯著緩解NEFAs誘導(dǎo)的胰島素抵抗,而抑制ATF6通路對其無顯著影響。表明IRE1α及PERK通路參與了NEFAs誘導(dǎo)肝細胞胰島素抵抗。為了進一步探究IRE1α通路介導(dǎo)NEFAs誘導(dǎo)肝細胞胰島素抵抗的機制,首先通過添加JNK抑制劑來評價JNK在NEFAs誘導(dǎo)肝細胞胰島素抵抗的影響。結(jié)果表明,抑制JNK活性可顯著降低IRS1的磷酸化水平、提高AKT、GSK3β的磷酸化水平,改善由NEFAs誘導(dǎo)的犢牛原代肝細胞的胰島素抵抗,進而干擾IRE1α可顯著降低NEFAs誘導(dǎo)的JNK活化及其下游炎性因子的表達。表明IRE1α可通過激活JNK途徑介導(dǎo)NEFAs誘導(dǎo)的胰島素抵抗。以上結(jié)果表明NEB奶牛肝臟存在ERS及胰島素抵抗。NEFAs可誘導(dǎo)犢牛原代肝細胞的ERS及胰島素抵抗,并且ERS在一定程度上介導(dǎo)NEFAs誘導(dǎo)的胰島素抵抗。IRE1α可通過激活JNK介導(dǎo)NEFAs誘導(dǎo)的犢牛原代肝細胞胰島素抵抗。
【關(guān)鍵詞】：奶牛過渡期 奶牛NEB 非酯化脂肪酸 胰島素抵抗 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S858.23
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-11
• 英文縮寫詞表11-13
• 前言13-14
• 第一篇 文獻綜述14-26
• 第1章 胰島素抵抗與奶牛能量負平衡14-20
• 1.1 胰島素抵抗14-15
• 1.2 胰島素抵抗發(fā)生機制15-17
• 1.3 奶牛能量負平衡17-18
• 1.4 NEFAs對肝臟的脂毒性18-20
• 第2章 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激20-26
• 2.1 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號通路簡介20-21
• 2.2 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與代謝之間的關(guān)系21-23
• 2.3 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與胰島素抵抗23-25
• 2.4 總結(jié)25-26
• 第二篇 研究內(nèi)容26-68
• 第1章 能量負平衡奶牛存在胰島素抵抗和ERS26-36
• 1.1 材料26-27
• 1.2 方法27-30
• 1.3 結(jié)果30-33
• 1.4 討論33-36
• 第2章 NEFAs對犢牛原代肝細胞ERS信號通路及胰島素信號通路的影響36-52
• 2.1 材料36-37
• 2.2 方法37-42
• 2.3 結(jié)果42-50
• 2.4 討論50-51
• 2.5 小結(jié)51-52
• 第3章 IRE1α 可通過JNK介導(dǎo)NEFAs誘導(dǎo)的犢牛肝細胞胰島素抵抗52-68
• 3.1 材料53
• 3.2 方法53-56
• 3.3 結(jié)果56-65
• 3.4 討論65-67
• 3.5 小結(jié)67-68
• 結(jié)論68-69
• 參考文獻69-80
• 導(dǎo)師簡介80-81
• 作者簡介81-82
• 在學(xué)期間所取得的科研成果82-83
• 致謝83-84

【參考文獻】

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 鄧清華;NEFAs對犢牛原代肝細胞糖脂代謝的調(diào)控機制[D];吉林大學(xué);2015年

2 李玉;奶牛酮病氧化應(yīng)激致肝細胞凋亡的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制研究[D];吉林大學(xué);2014年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 史曉霞;NEFAs和BHBA誘導(dǎo)氧化應(yīng)激對奶牛肝細胞NF-κB信號通路影響的研究[D];吉林大學(xué);2014年

  本文關(guān)鍵詞：NEFAs通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)奶牛肝細胞胰島素抵抗的信號機制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：328793