Leptin過表達對豬前脂肪細胞脂滴形成的研究
發(fā)布時間：2021-07-14 17:37
研究Leptin過表達對豬前脂肪細胞脂滴形成的影響,旨為進一步研究Leptin與脂質(zhì)代謝相關(guān)的分子機制奠定理論基礎(chǔ)。選取Leptin過表達與野生型豬皮下脂肪組織,在無菌條件下分離前脂肪細胞進行傳代培養(yǎng)并誘導分化形成脂滴,通過油紅O和Bodipy染色后觀察脂滴面積并分析脂質(zhì)的含量,利用Q-PCR檢測脂滴形成相關(guān)基因mRNA的表達水平。誘導4 d后可分化形成脂滴,油紅O和Bodipy染色的結(jié)果顯示,Leptin過表達豬前脂肪細胞脂滴數(shù)量和甘油三酯含量顯著低于野生型（P<0.05）;且脂質(zhì)合成相關(guān)基因PPARγ、SCAP、SREPB1和PLIN2的表達水平顯著低于野生型（P<0.01）。結(jié)果表明,過表達Leptin可促使豬前脂肪細胞中PPARγ、SREPB1、SCAP、PLIN2基因的表達下調(diào),進而抑制脂滴形成。
【文章來源】：生物技術(shù)通報. 2020,36(08)北大核心CSCD
【文章頁數(shù)】：9 頁
【部分圖文】：
Leptin過表達與野生型豬前脂肪細胞誘導分化過程中脂質(zhì)合成含量測定結(jié)果
Q-PCR結(jié)果顯示，Leptin過表達豬前脂肪細胞中Leptin的表達量顯著高于野生型豬前脂肪細胞（P<0.05）（圖3-A）。進一步利用Q-PCR檢測了誘導0 d和4 d后的豬前脂肪細胞中脂質(zhì)調(diào)節(jié)相關(guān)基因的表達情況。經(jīng)過4 d誘導后，在3個脂質(zhì)代謝相關(guān)的核轉(zhuǎn)錄因子，PPARγ和SREBP1的表達在野生型豬前脂肪細胞中極顯著升高（P<0.01),SCAP的表達水平顯著升高（P<0.05）；而在Leptin過表達豬前脂肪細胞中PPARγ的表達水平顯著升高（P<0.05),SREBP1和SCAP的表達無明顯變化（P>0.05）。與野生型相比，開始誘導時，Leptin過表達豬前脂肪細胞中PPARγ基因的表達呈現(xiàn)極顯著低的水平（P<0.01）；誘導4 d后，在Leptin過表達豬脂肪細胞中，以上3個基因的表達均極顯著降低（P<0.01）（圖3-B）。這些結(jié)果表明，Leptin過表達抑制了脂質(zhì)代謝通路中轉(zhuǎn)錄相關(guān)基因的表達。同時，誘導4 d后，脂肪酸轉(zhuǎn)位酶FAT-CD36和脂蛋白酯酶LPL的表達水平在野生型和Leptin過表達豬前脂肪細胞中均極顯著升高（P<0.01）。與野生型組相比，開始誘導時，在Leptin過表達豬脂肪細胞中FAT-CD36基因的表達均呈現(xiàn)極顯著低的水平（P<0.01）；誘導4 d后，在Leptin過表達豬前脂肪細胞中，F(xiàn)AT-CD36的表達仍顯著低于野生型（P<0.05),LPL的表達極顯著低于野生型（P<0.01）（圖3-C）。圖2 Leptin過表達與野生型豬前脂肪細胞誘導分化過程中脂質(zhì)合成含量測定結(jié)果
脂肪細胞的分化過程在激素誘導的培養(yǎng)體系中4 d內(nèi)完成，在分化的早期階段進入細胞周期，經(jīng)1-2次有絲分裂之后永久地退出細胞周期，開始蓄積脂滴，經(jīng)過終末分化階段分化為成熟脂肪細胞[47-48]。脂肪酸是合成甘油三酯的重要原料，有研究表明，F(xiàn)AT/CD36可將LCFA運輸?shù)街炯毎衃15]，過表達FAT/CD36可增強脂肪酸的轉(zhuǎn)運，而LPL是脂肪細胞早期分化的標志[49]。本實驗研究結(jié)果表明，Leptin過表達豬前脂肪細胞中LPL和FAT/CD36基因的mRNA表達水平顯著降低，與上述所報道的研究結(jié)果一致，表明Leptin在一定程度上可通過下調(diào)FAT/CD36、LPL基因的表達進而抑制LCFA的運輸和脂肪細胞的分化。也有研究報道，在脂肪細胞分化的初期階段，Leptin可抑制脂肪細胞脂肪酸的合成，從而減少脂肪沉積，PLIN2(Adipophilin）位于脂滴表面，還與脂滴的儲存密切相關(guān)[50-51]。外源性添加10 ng/mL Leptin可有效減少大鼠脂肪細胞TAG的積累[15]。PPARγ特異性激活劑羅格列酮（Ros）與Leptin聯(lián)合處理大鼠脂肪細胞，發(fā)現(xiàn)能有效減弱Leptin對PPARγ、PLIN2的mRNA表達的下調(diào)作用[6]。本研究結(jié)果顯示，過表達Leptin豬前脂肪細胞TAG合成的相關(guān)基因（GPAM,AGPAT6）與脂滴儲存相關(guān)基因PLIN2的mRNA表達水平均下調(diào)，與前人所報道的結(jié)果相一致，表明Leptin可通過下調(diào)TAG合成相關(guān)基因的表達及PLIN2基因的m RNA下調(diào)來抑制脂質(zhì)的儲存和積累。4 結(jié)論
本文編號：3284588
【文章來源】：生物技術(shù)通報. 2020,36(08)北大核心CSCD
【文章頁數(shù)】：9 頁
【部分圖文】：
Leptin過表達與野生型豬前脂肪細胞誘導分化過程中脂質(zhì)合成含量測定結(jié)果
Q-PCR結(jié)果顯示，Leptin過表達豬前脂肪細胞中Leptin的表達量顯著高于野生型豬前脂肪細胞（P<0.05）（圖3-A）。進一步利用Q-PCR檢測了誘導0 d和4 d后的豬前脂肪細胞中脂質(zhì)調(diào)節(jié)相關(guān)基因的表達情況。經(jīng)過4 d誘導后，在3個脂質(zhì)代謝相關(guān)的核轉(zhuǎn)錄因子，PPARγ和SREBP1的表達在野生型豬前脂肪細胞中極顯著升高（P<0.01),SCAP的表達水平顯著升高（P<0.05）；而在Leptin過表達豬前脂肪細胞中PPARγ的表達水平顯著升高（P<0.05),SREBP1和SCAP的表達無明顯變化（P>0.05）。與野生型相比，開始誘導時，Leptin過表達豬前脂肪細胞中PPARγ基因的表達呈現(xiàn)極顯著低的水平（P<0.01）；誘導4 d后，在Leptin過表達豬脂肪細胞中，以上3個基因的表達均極顯著降低（P<0.01）（圖3-B）。這些結(jié)果表明，Leptin過表達抑制了脂質(zhì)代謝通路中轉(zhuǎn)錄相關(guān)基因的表達。同時，誘導4 d后，脂肪酸轉(zhuǎn)位酶FAT-CD36和脂蛋白酯酶LPL的表達水平在野生型和Leptin過表達豬前脂肪細胞中均極顯著升高（P<0.01）。與野生型組相比，開始誘導時，在Leptin過表達豬脂肪細胞中FAT-CD36基因的表達均呈現(xiàn)極顯著低的水平（P<0.01）；誘導4 d后，在Leptin過表達豬前脂肪細胞中，F(xiàn)AT-CD36的表達仍顯著低于野生型（P<0.05),LPL的表達極顯著低于野生型（P<0.01）（圖3-C）。圖2 Leptin過表達與野生型豬前脂肪細胞誘導分化過程中脂質(zhì)合成含量測定結(jié)果
脂肪細胞的分化過程在激素誘導的培養(yǎng)體系中4 d內(nèi)完成，在分化的早期階段進入細胞周期，經(jīng)1-2次有絲分裂之后永久地退出細胞周期，開始蓄積脂滴，經(jīng)過終末分化階段分化為成熟脂肪細胞[47-48]。脂肪酸是合成甘油三酯的重要原料，有研究表明，F(xiàn)AT/CD36可將LCFA運輸?shù)街炯毎衃15]，過表達FAT/CD36可增強脂肪酸的轉(zhuǎn)運，而LPL是脂肪細胞早期分化的標志[49]。本實驗研究結(jié)果表明，Leptin過表達豬前脂肪細胞中LPL和FAT/CD36基因的mRNA表達水平顯著降低，與上述所報道的研究結(jié)果一致，表明Leptin在一定程度上可通過下調(diào)FAT/CD36、LPL基因的表達進而抑制LCFA的運輸和脂肪細胞的分化。也有研究報道，在脂肪細胞分化的初期階段，Leptin可抑制脂肪細胞脂肪酸的合成，從而減少脂肪沉積，PLIN2(Adipophilin）位于脂滴表面，還與脂滴的儲存密切相關(guān)[50-51]。外源性添加10 ng/mL Leptin可有效減少大鼠脂肪細胞TAG的積累[15]。PPARγ特異性激活劑羅格列酮（Ros）與Leptin聯(lián)合處理大鼠脂肪細胞，發(fā)現(xiàn)能有效減弱Leptin對PPARγ、PLIN2的mRNA表達的下調(diào)作用[6]。本研究結(jié)果顯示，過表達Leptin豬前脂肪細胞TAG合成的相關(guān)基因（GPAM,AGPAT6）與脂滴儲存相關(guān)基因PLIN2的mRNA表達水平均下調(diào)，與前人所報道的結(jié)果相一致，表明Leptin可通過下調(diào)TAG合成相關(guān)基因的表達及PLIN2基因的m RNA下調(diào)來抑制脂質(zhì)的儲存和積累。4 結(jié)論
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