研究Leptin過(guò)表達(dá)對(duì)豬前脂肪細(xì)胞脂滴形成的影響,旨為進(jìn)一步研究Leptin與脂質(zhì)代謝相關(guān)的分子機(jī)制奠定理論基礎(chǔ)。選取Leptin過(guò)表達(dá)與野生型豬皮下脂肪組織,在無(wú)菌條件下分離前脂肪細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)并誘導(dǎo)分化形成脂滴,通過(guò)油紅O和Bodipy染色后觀察脂滴面積并分析脂質(zhì)的含量,利用Q-PCR檢測(cè)脂滴形成相關(guān)基因mRNA的表達(dá)水平。誘導(dǎo)4 d后可分化形成脂滴,油紅O和Bodipy染色的結(jié)果顯示,Leptin過(guò)表達(dá)豬前脂肪細(xì)胞脂滴數(shù)量和甘油三酯含量顯著低于野生型（P<0.05）;且脂質(zhì)合成相關(guān)基因PPARγ、SCAP、SREPB1和PLIN2的表達(dá)水平顯著低于野生型（P<0.01）。結(jié)果表明,過(guò)表達(dá)Leptin可促使豬前脂肪細(xì)胞中PPARγ、SREPB1、SCAP、PLIN2基因的表達(dá)下調(diào),進(jìn)而抑制脂滴形成。 

【文章來(lái)源】：生物技術(shù)通報(bào). 2020,36(08)北大核心CSCD

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Leptin過(guò)表達(dá)與野生型豬前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化過(guò)程中脂質(zhì)合成含量測(cè)定結(jié)果

Q-PCR結(jié)果顯示，Leptin過(guò)表達(dá)豬前脂肪細(xì)胞中Leptin的表達(dá)量顯著高于野生型豬前脂肪細(xì)胞（P<0.05）（圖3-A）。進(jìn)一步利用Q-PCR檢測(cè)了誘導(dǎo)0 d和4 d后的豬前脂肪細(xì)胞中脂質(zhì)調(diào)節(jié)相關(guān)基因的表達(dá)情況。經(jīng)過(guò)4 d誘導(dǎo)后，在3個(gè)脂質(zhì)代謝相關(guān)的核轉(zhuǎn)錄因子，PPARγ和SREBP1的表達(dá)在野生型豬前脂肪細(xì)胞中極顯著升高（P<0.01),SCAP的表達(dá)水平顯著升高（P<0.05）；而在Leptin過(guò)表達(dá)豬前脂肪細(xì)胞中PPARγ的表達(dá)水平顯著升高（P<0.05),SREBP1和SCAP的表達(dá)無(wú)明顯變化（P>0.05）。與野生型相比，開始誘導(dǎo)時(shí)，Leptin過(guò)表達(dá)豬前脂肪細(xì)胞中PPARγ基因的表達(dá)呈現(xiàn)極顯著低的水平（P<0.01）；誘導(dǎo)4 d后，在Leptin過(guò)表達(dá)豬脂肪細(xì)胞中，以上3個(gè)基因的表達(dá)均極顯著降低（P<0.01）（圖3-B）。這些結(jié)果表明，Leptin過(guò)表達(dá)抑制了脂質(zhì)代謝通路中轉(zhuǎn)錄相關(guān)基因的表達(dá)。同時(shí)，誘導(dǎo)4 d后，脂肪酸轉(zhuǎn)位酶FAT-CD36和脂蛋白酯酶LPL的表達(dá)水平在野生型和Leptin過(guò)表達(dá)豬前脂肪細(xì)胞中均極顯著升高（P<0.01）。與野生型組相比，開始誘導(dǎo)時(shí)，在Leptin過(guò)表達(dá)豬脂肪細(xì)胞中FAT-CD36基因的表達(dá)均呈現(xiàn)極顯著低的水平（P<0.01）；誘導(dǎo)4 d后，在Leptin過(guò)表達(dá)豬前脂肪細(xì)胞中，F(xiàn)AT-CD36的表達(dá)仍顯著低于野生型（P<0.05),LPL的表達(dá)極顯著低于野生型（P<0.01）（圖3-C）。圖2 Leptin過(guò)表達(dá)與野生型豬前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化過(guò)程中脂質(zhì)合成含量測(cè)定結(jié)果

脂肪細(xì)胞的分化過(guò)程在激素誘導(dǎo)的培養(yǎng)體系中4 d內(nèi)完成，在分化的早期階段進(jìn)入細(xì)胞周期，經(jīng)1-2次有絲分裂之后永久地退出細(xì)胞周期，開始蓄積脂滴，經(jīng)過(guò)終末分化階段分化為成熟脂肪細(xì)胞[47-48]。脂肪酸是合成甘油三酯的重要原料，有研究表明，F(xiàn)AT/CD36可將LCFA運(yùn)輸?shù)街炯?xì)胞中[15]，過(guò)表達(dá)FAT/CD36可增強(qiáng)脂肪酸的轉(zhuǎn)運(yùn)，而LPL是脂肪細(xì)胞早期分化的標(biāo)志[49]。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，Leptin過(guò)表達(dá)豬前脂肪細(xì)胞中LPL和FAT/CD36基因的mRNA表達(dá)水平顯著降低，與上述所報(bào)道的研究結(jié)果一致，表明Leptin在一定程度上可通過(guò)下調(diào)FAT/CD36、LPL基因的表達(dá)進(jìn)而抑制LCFA的運(yùn)輸和脂肪細(xì)胞的分化。也有研究報(bào)道，在脂肪細(xì)胞分化的初期階段，Leptin可抑制脂肪細(xì)胞脂肪酸的合成，從而減少脂肪沉積，PLIN2(Adipophilin）位于脂滴表面，還與脂滴的儲(chǔ)存密切相關(guān)[50-51]。外源性添加10 ng/mL Leptin可有效減少大鼠脂肪細(xì)胞TAG的積累[15]。PPARγ特異性激活劑羅格列酮（Ros）與Leptin聯(lián)合處理大鼠脂肪細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)能有效減弱Leptin對(duì)PPARγ、PLIN2的mRNA表達(dá)的下調(diào)作用[6]。本研究結(jié)果顯示，過(guò)表達(dá)Leptin豬前脂肪細(xì)胞TAG合成的相關(guān)基因（GPAM,AGPAT6）與脂滴儲(chǔ)存相關(guān)基因PLIN2的mRNA表達(dá)水平均下調(diào)，與前人所報(bào)道的結(jié)果相一致，表明Leptin可通過(guò)下調(diào)TAG合成相關(guān)基因的表達(dá)及PLIN2基因的m RNA下調(diào)來(lái)抑制脂質(zhì)的儲(chǔ)存和積累。4 結(jié)論


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