圍產(chǎn)期和泌乳前期的高產(chǎn)奶牛由于生理的變化和高的代謝水平,抗氧化功能顯著降低,容易誘發(fā)氧化應(yīng)激,導(dǎo)致疾病易感性增加。奶牛乳腺上皮細(xì)胞（BMEC）是乳脂和乳蛋白合成與分泌的重要場所,其細(xì)胞的生物合成能力決定了奶牛乳腺的產(chǎn)奶能力。因此,深入研究硒（Se）減緩BMEC氧化應(yīng)激的機(jī)理對科學(xué)合理的補(bǔ)加Se,緩解奶牛氧化應(yīng)激,優(yōu)化奶牛抗氧化防御能力具有重要的理論與實(shí)際意義。本論文以BMEC為細(xì)胞模型,分別以外源性一氧化氮（NO）誘導(dǎo)細(xì)胞氧化損傷、以二硝基氯苯（DNCB）抑制硫氧還蛋白還原酶（TrxR）活性并誘導(dǎo)細(xì)胞氧化損傷、以白介素1受體拮抗劑（IL-1Ra）抑制白介素-1（IL-1）生物活性、以絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路抑制劑抑制其磷酸化水平、并結(jié)合過表達(dá)技術(shù)對TrxR1進(jìn)行過表達(dá),從TrxR1/MAPK/NO途徑深入研究了 Se緩解BMEC氧化損傷的可能機(jī)制。本論文共分為6個(gè)試驗(yàn)。試驗(yàn)1采用單因子完全隨機(jī)試驗(yàn)設(shè)計(jì),研究不同劑量的Se（0、10、20、50、100、150、200 nmol/L）對BMEC抗氧化功能的調(diào)節(jié)作用,初探正常生理?xiàng)l件下Se對TrxR活性和NO合成的影響,為進(jìn)一步探... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：187 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖２?研究技術(shù)路線??Ｆｉｇ．２?Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ?ｆｌｏｗｃｈａｒｔ?ｏｆ?ｓｔｕｄｙ??

?內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文?２９??ＤＬ?１０００，檢測ＰＣＲ產(chǎn)物分子量大小，詳見圖３。進(jìn)一步將ＰＣＲ產(chǎn)物送往上海生工??技術(shù)服務(wù)有限公司進(jìn)行序列分析。??表３實(shí)時(shí)熒光定量ＰＣＲ體系??Ｔａｂｌｅ．?３?Ｒｅａｌ?ｔｉｍｅ?ＰＣＲ?ｓｙｓｔｅｍ??反應(yīng)體系組成?終濃度?體積??Ｒｅａｃｔｉｏｎ?ｓｙｓｔｅｍ?ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ?Ｆｉｎａｌ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ?Ｖｏｌｕｍｅ?（ｇＬ）??ＳＹＢＹＰｒｅｍｉｘ?Ｅｘ?Ｔａｑ？?ｌｘ?１０??ＰＣＲ?Ｆｏｒｗａｒｄ?Ｐｒｉｍｅｒ?（１?ＯｊｉＭ）?０．２｜ｉＭ?０．４??ＰＣＲ?Ｒｅｖｅｒｓｅ?Ｐｒｉｍｅｒ?（１?Ｏ＾ｉＭ）?０．２｜ｉＭ?０．４??ｃＤＮＡ?２??ＲＮａｓｅ?Ｆｒｅｅ?Ｈ２０?７．２??Ｔｏｔａｌ?２０??表４實(shí)時(shí)熒光定量ＰＣＲ反應(yīng)??Ｔａｂｌｅ．４?Ｒｅａｌ?ｔｉｍｅ?ＰＣＲ?ｒｅａｃｔｉｏｎ??反應(yīng)?溫度?時(shí)間Ｘ循環(huán)??Ｒｅａｃｔｉｏｎ?Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ?ＴｉｍｅｘＣｙｃｌｅｓ??預(yù)變性?９５．０°Ｃ?３０ｓ??變性?９５．０°Ｃ?３０ｓ??退火?６０．０－Ｃ?３０ｓ?ｘ４０??延伸?７２．０＊Ｃ?２０ｓ??終延伸?７０．（ＴＣ?０．０６ｓ?ｘ５１??圖３瓊脂糖凝膠電泳鑒定不同目的基因的ＲＴ－ｑＰＣＲ產(chǎn)物??Ｆｉｇ．?３?Ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｏｆ?ＲＴ－ｑＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｆｏｒ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｔａｒｇｅｔ?ｇｅｎｅｓ??

?內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文?４３??－＾―?２ｈ???〇■…４１ｉ??—＾—６ｈ??１００－?□……８ｈ??Ｉ?；??＾６〇－??５０－?、．、？＇??．?？、，＇采?????＾??４０?－?＊?Ｉ?－＊??３０?Ｊ?，?，?，?，???，?，?，?，?，?，?，?，?，??０?２５０?５００?７５０?１０００?１２５０?１５００??ＮＯ添加水平〇ｉｍｏｌ／Ｌ）??圖４?ＮＯ濃度及作用時(shí)間對ＢＭＥＣ相對增殖率的影響（％）??Ｆｉｇ．４?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ?ａｎｄ?ａｃｔｉｏｎ?ｔｉｍｅ?ｏｆ?ＮＯ?ｏｎ?ＲＧＲ?（％）??２．２．３．２?ＮＯ處理對抗氧化酶活性及ＭＤＡ含量的影響??由表９和圖５可以看出，與ＣＯＮ組相比，所有ＮＯ處理組的細(xì)胞ＳＯＤ活性均顯??著降低（Ｐ＜〇．〇〇〇ｌ?）。其中，濃度為１２５０、１５００?ｐｍｏｌ／Ｌ的ＮＯ處理組ＳＯＤ活性較低，??顯著低于２５０、５００和７５０?ｐｍｏｌ／Ｌ處理組，但與１０００?ｐｍｏｌ／Ｌ處理組無顯著差異（尸??＞０．１０）；?１０００?ｐｍｏｌ／Ｌ處理組顯著低于２５０、５００?ｎｍ〇ｌ／Ｌ處理組。與ＣＯＮ相比，除??２５０?ｐｍｏｌ／Ｌ處理組夕卜，其余各Ｎ？處理組的ＣＡＴ活性均顯著低于ＣＯＮ（Ｐ＜０．０００１?），??其中，濃度為１０００、１２５０、１５００?ｐｍｏｌ／Ｌ的ＮＯ處理組ＣＡＴ活性間無顯著差異，且顯??著低于其余各組，尤以１５００＾ｍ〇ｌ／Ｌ處理組最低。細(xì)胞中ＧＰｘ活性也呈現(xiàn)相似的變化??規(guī)律。相反地，ＭＤＡ含量則呈現(xiàn)相反的變化規(guī)律，與ＣＯＮ相比，２５０、５００、７５０叫ｎｏｌ／Ｌ??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[8]奶牛肢蹄病患牛體內(nèi)礦物元素和氧化應(yīng)激指標(biāo)的變化[D]. 李忠鵬.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
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[10]山羊chop基因過表達(dá)和shRNA干擾慢病毒載體的構(gòu)建和鑒定[D]. 孫晉.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2014



本文編號(hào)：3275296