發(fā)布時間：2021-07-09 12:19

　　本研究使用蛋白標(biāo)記藥物Puromycin標(biāo)記NDV感染后DF-1細(xì)胞新合成的蛋白,發(fā)現(xiàn)NDV感染后新蛋白合成量顯著下調(diào),而病毒NP蛋白的含量卻隨感染時間的延長呈增加趨勢。為探究NDV的感染對DF-1細(xì)胞核糖體大亞基L11蛋白（RPL 11）表達(dá)水平的影響,分別收獲NDV（MOI 1）感染后不同時間（8 h、16 h、24 h和32 h）和不同劑量NDV（MOI 1、0.1）感染后相同時間的細(xì)胞樣品,采用western blot、激光共聚焦、熒光定量PCR分別檢測內(nèi)源性RPL 11的蛋白表達(dá)和mRNA轉(zhuǎn)錄水平。Western blot結(jié)果顯示NDV感染后核糖體蛋白RPL 11的表達(dá)量顯著降低,并且與病毒感染時間和感染劑量呈正相關(guān)。激光共聚焦結(jié)果顯示,NDV感染后細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)中的RPL 11熒光信號均明顯減弱。但熒光定量PCR結(jié)果顯示,該基因的轉(zhuǎn)錄水平卻無明顯變化,表明其蛋白表達(dá)量的減少發(fā)生在翻譯后修飾環(huán)節(jié)。構(gòu)建重組質(zhì)粒pFlag-RPL 11轉(zhuǎn)染DF-1細(xì)胞24 h后再感染不同劑量NDV（MOI 1、0.1）,通過western blot檢測外源性RPL 11的表達(dá)水平。結(jié)果顯示外源性... 

【文章來源】：中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 2020,42(10)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

NDV感染后puromycin標(biāo)記蛋白含量的檢測結(jié)果

構(gòu)建的重組質(zhì)粒p Flag-RPL11經(jīng)測序鑒定正確后轉(zhuǎn)染DF-1細(xì)胞，24 h后收集細(xì)胞蛋白樣品。western blot結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒的細(xì)胞相對轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的對照細(xì)胞在20 ku～25 ku的位置出現(xiàn)了特異性條帶與預(yù)期一致（圖4A），表明重組質(zhì)粒在DF-1細(xì)胞中表達(dá)了RPL11蛋白。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染DF-1細(xì)胞24 h后，再分別以不同劑量的NDV感染24 h,western blot檢測結(jié)果顯示與對照細(xì)胞相比，NDV感染細(xì)胞的外源RPL11的表達(dá)量明顯下降，且下降程度隨著感染病毒劑量的增加而更明顯，病毒NP蛋白的表達(dá)量卻在增加（圖4B）。以上結(jié)果表明NDV感染細(xì)胞后也可以導(dǎo)致外源RPL11蛋白表達(dá)水平下降，且該下降程度與病毒的感染劑量呈正相關(guān)。圖3 NDV感染后RPL11蛋白分布變化的激光共聚焦檢測結(jié)果

NDV感染后RPL11蛋白分布變化的激光共聚焦檢測結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]26S蛋白酶體調(diào)控微管蛋白的降解[J]. 潘婷,楊慕童,劉陽軒,孫秀強(qiáng),涂升斌,Jan Smalle,汪松虎.  四川大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2019(02)
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本文編號：3273733