發(fā)布時(shí)間：2021-07-09 05:33

　　禽類性別分化和性腺發(fā)育一直是禽類發(fā)育生物學(xué)研究的熱點(diǎn),但具體的性別分化及性腺發(fā)育的調(diào)控機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。研究發(fā)現(xiàn)與生殖系統(tǒng)發(fā)育及其功能維持密切相關(guān)的雌激素受體基因ERa在雞性別決定早期性腺發(fā)育中有重要作用。已有研究表明ERa基因具有多個(gè)啟動(dòng)子,且不同啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物不同（即存在不同剪切體）,本研究首先擬對(duì)ERa基因5’上游區(qū)域進(jìn)行研究,找出多個(gè)啟動(dòng)子的活性差異,在此基礎(chǔ)上研究單個(gè)啟動(dòng)子調(diào)控的選擇性剪切變體在雞胚發(fā)育期及成年開(kāi)產(chǎn)期不同組織中的表達(dá)差異,并與多個(gè)啟動(dòng)子調(diào)控的ERa總表達(dá)進(jìn)行比對(duì),探究二者之間的關(guān)系。實(shí)驗(yàn)采用雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)的方法,對(duì)構(gòu)建的ERa基因啟動(dòng)子缺失片段進(jìn)行啟動(dòng)子活性檢測(cè)；用半定量RT-PCR的方法對(duì)剪切體和ERa的表達(dá)進(jìn)行定量分析。具體結(jié)果如下：1、用3種細(xì)胞對(duì)含啟動(dòng)子缺失片段的雙熒光素酶報(bào)告載體進(jìn)行轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)并進(jìn)行啟動(dòng)子活性檢測(cè),發(fā)現(xiàn)DF1細(xì)胞的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)未檢測(cè)出啟動(dòng)子活性,PK15和Hela細(xì)胞的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)檢測(cè)出啟動(dòng)子活性差異,活性依次為ERaPF1（+52～+216）﹥ERαPF3（-238～+216）﹥ERαPF4（-403～+216）>﹥ERα... 

【文章來(lái)源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：63 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
1 前言
    1.1 研究問(wèn)題的由來(lái)
    1.2 禽類性別決定及性腺發(fā)育相關(guān)的研究進(jìn)展
        1.2.1 禽類性別決定及性腺分化
        1.2.2 性激素與禽類性別分化的關(guān)系
        1.2.3 核激素受體及ERα的研究進(jìn)展
    1.3 選擇性剪切及ERα選擇性剪切的相關(guān)研究進(jìn)展
        1.3.1 選擇性剪切
        1.3.2 ERα基因的選擇性剪切
    1.4 研究目的與意義
        1.4.1 研究目的
        1.4.2 研究意義
2 材料和方法
    2.1 材料
        2.1.1 主要試劑及溶液的配制
        2.1.2 主要器材
        2.1.3 生物信息學(xué)分析相關(guān)的軟件和數(shù)據(jù)庫(kù)
    2.2 方法
        2.2.1 雞ERα基因啟動(dòng)子活性檢測(cè)
        2.2.2 半定量RT-PCR檢測(cè)ERα基因不同剪切體
3 結(jié)果與分析
    3.1 ERα基因不同啟動(dòng)子缺失片段的活性檢測(cè)
        3.1.1 啟動(dòng)子缺失片段的擴(kuò)增
        3.1.2 熒光素酶報(bào)告基因載體的構(gòu)建
        3.1.3 細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染
    3.2 ERα基因不同剪切體時(shí)空表達(dá)的檢測(cè)
        3.2.1 雞胚組織提取、性別鑒定、RNA提取及cDNA的制備
        3.2.2 不同時(shí)期不同組織中C剪切體的半定量檢測(cè)
        3.2.3 不同時(shí)期不同組織中D剪切體的半定量檢測(cè)
4 討論
    4.1 不同細(xì)胞中ERα基因啟動(dòng)子活性檢測(cè)的研究
    4.2 不同時(shí)期肝臟中ERα基因及其C剪切體表達(dá)的研究
    4.3 6月齡成年雞中ERα基因及其D剪切體表達(dá)的研究
    4.4 不同胚胎期中ERα基因及其D剪切體表達(dá)的研究
5 小結(jié)
    5.1 本研究所取得的結(jié)果
    5.2 下一步需要研究的問(wèn)題
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]雞性別決定機(jī)制的研究進(jìn)展[J]. 賈存靈,魏澤輝.  中國(guó)家禽. 2010(12)
[2]雞性別決定機(jī)制及相關(guān)基因研究進(jìn)展[J]. 孟和,潘玉春.  動(dòng)物學(xué)雜志. 2005(02)
[3]雞胚PGCs遷移與性腺發(fā)育關(guān)系的研究[J]. 李碧春,陳國(guó)宏,趙東偉,王克華,錢(qián)菊汾.  揚(yáng)州大學(xué)學(xué)報(bào). 2002(01)



本文編號(hào)：3273134