胸膜肺炎放線桿菌（Actinobacillus pleuropneumoniae, APP）是屬于巴氏桿菌科放線桿菌屬的革蘭氏陰性球桿菌,能引起豬的傳染性胸膜肺炎。該病的臨床特征主要表現(xiàn)為肺壞死、出血和胸膜肺炎,具有高度接觸傳染性和致死性。目前,除了少部分尚未定型的菌株外,APP主要包括15種血清型,預防和控制本病依然主要使用滅活疫苗,由于型之間的交叉保護力不好,導致滅活苗的保護效果十分有限。本試驗主要是對胸膜肺炎放線桿菌的omlA、plpA、lolB、omp2、ompAe及plpB六個外膜蛋白進行了克隆及原核表達,并研究了它們的免疫原性。從湖南送檢的疑似胸膜肺炎的豬病料中分離到一株APP,并對其做了PCR鑒定、生化試驗、藥敏試驗及動物感染試驗,確定該株APP為血清1型。根據(jù)GenBank中發(fā)表的胸膜肺炎放線桿菌的全基因序列（Accession:CP001091）,利用DNAstar軟件挑選出6個外膜蛋白基因設(shè)計引物,其中ompAe基因引物中設(shè)有BamH Ⅰ和Sal Ⅰ兩個酶切位點,其它五個蛋白基因均含有EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ兩個酶切位點。以APP全菌為模板對各目的基因進行PCR擴增... 

【文章來源】：湖南農(nóng)業(yè)大學湖南省

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
第一章 文獻綜述
    1 病原學特性
    2 臨床特征及病理變化
    3 主要毒力因子
    4 APP的診斷方法研究
    5 免疫預防
    6 展望
第二章 豬胸膜肺炎放線桿菌的分離與鑒定及其對小鼠致病性試驗
    1 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 病料來源
            1.1.2 主要培養(yǎng)基
            1.1.3 主要試劑
            1.1.4 試驗動物
        1.2 方法
            1.2.1 細菌的分離
            1.2.2 形態(tài)學觀察
            1.2.3 V因子(NAD)依賴試驗
            1.2.4 生化試驗
            1.2.5 藥敏試驗
            1.2.6 PCR鑒定
            1.2.7 序列測定
            1.2.8 動物感染試驗
    2 結(jié)果與分析
        2.1 細菌分離及培養(yǎng)特性
        2.2 生化試驗
        2.3 藥敏試驗
        2.4 PCR鑒定及序列分析
        2.5 動物感染試驗
            2.5.1 臨床癥狀與剖檢病理變化
            2.5.2 病原菌的分離及鑒定
    3 討論
    4 小結(jié)
第三章 豬胸膜肺炎放線桿菌lolB、plpA、plpB、omp2、omlA和ompAe基因的克隆表達及其免疫原性分析
    1 材料和方法
        1.1 材料
            1.1.1 菌種和載體
            1.1.2 主要試劑
            1.1.3 引物合成
        1.2 方法
            1.2.1 PCR模板的制備
            1.2.2 目的基因的PCR擴增
            1.2.3 融合表達載體的構(gòu)建及連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化
            1.2.4 陽性轉(zhuǎn)化子的鑒定及重組質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定
            1.2.5 重組蛋白的誘導表達及鑒定
            1.2.6 重組蛋白的大量誘導及純化
            1.2.7 重組蛋白的Western blot鑒定
            1.2.8 昆明小鼠的免疫試驗
    2 結(jié)果與分析
        2.1 APP的6個目的基因的擴增、序列分析及酶切鑒定
        2.2 重組蛋白的SDS-PAGE鑒定
        2.3 六個重組蛋白的純化及Western blot鑒定
        2.4 免疫攻毒保護試驗
    3 討論
    4 小結(jié)
第四章 LTB-omp2、LTB-omlA的克隆表達及與omlA及omp2的免疫原性分析
    1 材料和方法
        1.1 材料
        1.2 方法
            1.2.1 PCR擴增
            1.2.2 融合表達載體的構(gòu)建及鑒定
            1.2.3 融合蛋白的誘導表達、鑒定及純化
            1.2.4 重組蛋白的主動免疫保護性試驗
    2 結(jié)果與分析
        2.1 LTB-omp2及LTB-omlA的陽性鑒定、序列測定及分析
        2.2 融合蛋白的SDS-PAGE鑒定
        2.3 昆明小鼠免疫攻毒保護試驗
    3 討論
    4 小結(jié)
總結(jié)
參考文獻
符號說明
致謝
個人簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
[1]豬胸膜肺炎放線桿菌四川株的分離鑒定及藥物敏感性試驗[J]. 彭娟,楊澤曉,宋勇,王印.  中國畜牧獸醫(yī). 2011(10)
[2]豬傳染性胸膜肺炎的流行特點與綜合防治[J]. 潘耀榮,謝凱崇,陳正飛.  今日畜牧獸醫(yī). 2011(10)
[3]豬傳染性胸膜肺炎的研究進展[J]. 王亞軍,段艷萍.  獸醫(yī)導刊. 2008(01)
[4]淄博地區(qū)豬胸膜肺炎放線桿菌的分離鑒定及藥敏試驗[J]. 陳凱,杜愛慶,張偉,曲德福,戰(zhàn)玉萍.  山東畜牧獸醫(yī). 2007(03)
[5]豬傳染性胸膜肺炎重組亞單位疫苗保護效果的評價及其免疫機制的研究[J]. 王勇,劉思國,王春來,邵美麗,宮強,劉建東,遲磊,趙昆,郭設(shè)平,李廣興.  中國獸醫(yī)科學. 2006(12)
[6]豬胸膜肺炎放線桿菌的分離與鑒定[J]. 劉霞,刁有祥,趙樂,孟凡磊,王輝,王妮,劉方娜,禚寶山.  家畜生態(tài)學報. 2006(03)
[7]豬胸膜肺炎放線桿菌山東分離株的血清型與Apx毒素型研究[J]. 刁有祥,丁家波,姜世金,陳本龍,崔治中.  中國農(nóng)業(yè)科學. 2005(11)
[8]豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌毒素apxⅡA基因的真核表達及其核酸疫苗[J]. 貝為成,嚴琳,何啟蓋,肖少波,陳煥春.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學報. 2005(05)
[9]豬胸膜肺炎放線桿菌的分離鑒定及自家疫苗的制備[J]. 劉輝,田穎.  畜牧獸醫(yī)科技信息. 2005(03)
[10]胸膜肺炎放線桿菌生物學特性概述[J]. 張耀相,楊會霞,李健強.  動物醫(yī)學進展. 2004(06)

碩士論文
[1]胸膜肺炎放線桿菌血清學分型和基因分型的研究[D]. 陳凡.華中農(nóng)業(yè)大學 2004



本文編號：3270833