間充質(zhì)干細胞（mesenchymal stem cells, MSCs）是一類具有高度增殖、自我更新和多向分化潛能的細胞。對許多物種的研究證明這類干細胞在體外可分化為多種細胞表型，是未來細胞、基因治療、組織工程的理想種子細胞之一。目前尚未見綿羊尤其是蒙古綿羊間充質(zhì)干細胞的研究報道。本研究旨在建立蒙古羊骨髓間充質(zhì)干細胞（Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells，BMSCs）和脂肪間充質(zhì)干細胞（Adipose-derived Mesenchymal Stem Cells,ADSCs）系，了解其生物學(xué)特征，并在體外進行成脂、成骨和軟骨誘導(dǎo)分化與鑒定，為今后利用這類間充質(zhì)干細胞作為疾病細胞、基因治療的模型，以及將其作為體細胞克隆核供體的研究奠定必要的基礎(chǔ)。本文以成年蒙古綿羊為實驗對象，采集股骨骨髓和腎臟外圍脂肪組織，采用密度梯度離心法和膠原酶消化法獲得骨髓和脂肪間充質(zhì)細胞，系統(tǒng)地研究了其生物學(xué)特性以及體外誘導(dǎo)分化能力。主要結(jié)果如下：1、分離得到的蒙古羊BMSCs和ADSCs形態(tài)均呈現(xiàn)長梭形，易形成細胞集落。二者生長曲線都表現(xiàn)為S形。經(jīng)計算其細胞倍增時... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

蒙古羊骨髓間充質(zhì)干細胞形態(tài)

少量血細胞相混雜；48h后少量細胞貼壁，形態(tài)不規(guī)則。3d后貼壁細胞增多，4d后細胞集落形成，6d后細胞集落增多，細胞多呈長梭形及多角形，并逐漸融合成片狀（圖1A圖2A），9d后細胞相互融合基本鋪滿孔底, 呈旋渦狀排列可進行傳代培養(yǎng)。傳代細胞增殖迅速，呈放射狀向周圍拓展，逐漸與鄰近集落相互匯合。P3代后的細胞形態(tài)基本一致，生長細胞為均一長梭形，6-7d細胞再次達80%匯合（圖1B圖2D）。

的規(guī)則的集落。2.2.2 MSCs 的倍增時間蒙古羊MSCs生長曲線呈S型（圖3-4），P1、P3、P10分別為傳代培養(yǎng)第1代、第3代及第10代。三者生長曲線形態(tài)基本一致，生長速度差異不大，均表現(xiàn)為：1-2d為潛伏期，生長較慢；3d后進入對數(shù)生長期，步入快速增長期；7-8d為平臺

【參考文獻】：
期刊論文
[1]奶山羊胎兒成纖維細胞的分離培養(yǎng)及脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染研究[J]. 張艷麗,許丹,龐訓(xùn)勝,萬永杰,王子玉,孟立,宋輝,王鋒.  南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2010(01)
[2]兔骨髓間充質(zhì)干細胞誘導(dǎo)分化為軟骨組織的實驗研究[J]. 黃定強,梁傳余,王力紅,劉世喜,李勝富.  臨床耳鼻咽喉科雜志. 2005(04)
[3]造血基質(zhì)干細胞的研究Ⅱ.異位移植骨髓的造血重建[J]. 范洪學(xué),劉及.  白求恩醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 1989(02)

博士論文
[1]骨髓與脂肪間質(zhì)干細胞分離與誘導(dǎo)分化為成骨細胞的研究[D]. 馬勇江.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2004
[2]成人MSC誘導(dǎo)分化為骨和軟骨細胞及與胎兒MSC間差異表達基因的篩選[D]. 楊莉.重慶醫(yī)科大學(xué) 2001



本文編號：3270417