豬傳染性胸膜肺炎（Porcine Contagious Pleuropneumonia,PCP）是由胸膜肺炎放線桿菌（Actinobacillus pleuropneumoniae,APP）引起的一種豬的接觸傳染性呼吸道疾病,主要引起肺的纖維性滲出、壞死性肺炎及肺膜的增厚炎性滲出,給世界養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前疫苗接種仍然是預(yù)防控制該病的主要措施,因而獲取一種針對胸膜肺炎放線桿菌安全、高效、具備良好的交叉保護(hù)力的疫苗擁有極大的前景。弱毒活疫苗免疫動(dòng)物后可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫力,可獲得一定的對異型血清型菌的交叉保護(hù)力。主要研究內(nèi)容如下。1、五基因缺失疫苗菌株構(gòu)建及生物學(xué)特性的研究本研究通過接合轉(zhuǎn)移和同源重組等方法在四基因缺失疫苗菌株CH04（△apxIC/△apxⅡC/△apxⅣ-orfl/△cpxAR）的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步敲除了areA雙組份基因,成功構(gòu)建五基因缺失疫苗菌株YWJ05（△apxIC/△apxlIC/△apxⅣ-orfl/△cpxAR/△arcA）,生長速率結(jié)果表明：較之CH04和APP血清1型野毒（WT,下同）菌株,YWJ05菌株的生長速率下降不顯著。在體外采用PK-1... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞（Abbreviation)
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 豬傳染性胸膜肺炎的危害與防治
        1.1.1 病原生理生化特性
        1.1.2 流行病學(xué)
    1.2 疫苗研究進(jìn)展
        1.2.1 滅活苗
        1.2.2 亞單位疫苗
        1.2.3 口服疫苗
        1.2.4 核酸疫苗
        1.2.5 Ghosts疫苗
        1.2.6 弱毒疫苗
    1.3 細(xì)菌雙組份調(diào)控系統(tǒng)研究進(jìn)展
第2章 研究目的與意義
第3章 材料與方法
    3.1 試驗(yàn)材料
        3.1.1 菌株、質(zhì)粒和培養(yǎng)條件
        3.1.2 工具酶和試劑
        3.1.3 試驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.4 培養(yǎng)基及抗生素配制
        3.1.5 ELISA相關(guān)溶液的配制
        3.1.6 其它緩沖液及試劑
        3.1.7 引物
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 細(xì)菌的增殖及胸膜肺炎放線桿菌基因組的提取
        3.2.2 PCR產(chǎn)物或酶切產(chǎn)物的回收與純化
        3.2.3 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備(氯化鈣法)
        3.2.4 質(zhì)粒的小量制備
        3.2.5 重組質(zhì)粒的鑒定
            3.2.5.1 PCR鑒定
            3.2.5.2 酶切鑒定
        3.2.6 突變株的構(gòu)建
        3.2.7 細(xì)菌RNA提取
        3.2.8 DnaseⅠ消化RNA中殘余的DNA
        3.2.9 反轉(zhuǎn)錄PCR
        3.2.10 突變株遺傳穩(wěn)定性分析
        3.2.11 突變株生長特性的研究
        3.2.12 細(xì)胞感染實(shí)驗(yàn)
            3.2.12.1 細(xì)胞的培養(yǎng)
            3.2.12.2 細(xì)胞侵入實(shí)驗(yàn)
            3.2.12.3 細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)
        3.2.13 中性粒細(xì)胞(PMN)介導(dǎo)的殺菌實(shí)驗(yàn)
            3.2.13.1 豬中性粒細(xì)胞的分離
            3.2.13.2 細(xì)菌的處理
            3.2.13.3 PMN殺菌實(shí)驗(yàn)
        3.2.14 細(xì)胞吞噬試驗(yàn)
            3.2.14.1 細(xì)胞準(zhǔn)備
            3.2.14.2 細(xì)胞吞噬試驗(yàn)
        3.2.15 突變株毒力分析
        3.2.16 淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)(MTT)
        3.2.17 全血?dú)⒕囼?yàn)
        3.2.18 抗體檢測分析
        3.2.19 抗體分型檢測
        3.2.20 ELISA試劑盒檢測細(xì)胞因子水平
        3.2.21 突變株對小鼠的免疫保護(hù)試驗(yàn)
        3.2.22 病理切片制備
        3.2.23 統(tǒng)計(jì)分析
第4章 結(jié)果與分析
    4.1 重組質(zhì)粒構(gòu)建及單交換菌株篩選
    4.2 突變株的篩選和鑒定
    4.3 突變株遺傳穩(wěn)定
    4.4 突變株生長特性
    4.5 細(xì)胞粘附和侵入試驗(yàn)
    4.6 豬中性粒細(xì)胞介導(dǎo)殺傷試驗(yàn)
    4.7 RAW與PAM
    4.8 小鼠毒力試驗(yàn)
    4.9 淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)
    4.10 小鼠全血?dú)⒕囼?yàn)
    4.11 抗體檢測試驗(yàn)
    4.12 抗體分型檢測試驗(yàn)
    4.13 細(xì)胞因子檢測
    4.14 小鼠免疫保護(hù)力試驗(yàn)
    4.15 病理切片分析
第5章 討論
    5.1 親本菌株的選擇
    5.2 目的基因的選擇
    5.3 生物學(xué)特性分析
    5.4 突變株致病力分析
    5.5 突變株免疫保護(hù)效能
    5.6 后續(xù)工作展望
第6章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：3261848