弓形蟲(chóng)�。═oxoplasmosis）是由專(zhuān)性細(xì)胞內(nèi)剛地弓形蟲(chóng)（Toxoplasma gondii）寄生于人和多種動(dòng)物而引起的一種人獸共患病。它不僅給畜牧業(yè)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失,同時(shí)造成孕婦的流產(chǎn)、死產(chǎn)等,可垂直傳播給胎兒,致使胎兒的先天性疾��；也是造成艾滋病、惡性腫瘤等免疫缺陷患者死亡的重要病因。貓是弓形蟲(chóng)的終末宿主,因此針對(duì)貓弓形蟲(chóng)病疫苗的研發(fā)顯得尤為重要。以病毒為載體的疫苗得到了良好的免疫效果,貓皰疹病毒Ⅰ型（Feline Herpesvirus type1,FHV-1）是一個(gè)很好的疫苗候選載體,TK基因是皰疹病毒增殖的非必需基因和主要的毒力基因,允許大容量的外源基因插入和表達(dá)。應(yīng)用RT-PCR方法擴(kuò)增弓形蟲(chóng)RH株SAG1和GRA4基因,構(gòu)建了pMD-18T-SAG1/GRA4克隆載體、pCold Ⅲ-SAG1/GRA4原核表達(dá)載體、pBluescipt-TK轉(zhuǎn)移載體及重組貓皰疹病毒穿梭質(zhì)粒pB S-TK-SAG1/GRA4；將pColdⅢ-SAG1/GRA4原核表達(dá)載體轉(zhuǎn)化至E.coli BL21感受態(tài)細(xì)胞,IPTG誘導(dǎo),SDS-PAGE和Western-blot分析表達(dá)產(chǎn)物,... 

【文章來(lái)源】：延邊大學(xué)吉林省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：52 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
    1 弓形蟲(chóng)概述
        1.1 弓形蟲(chóng)
        1.2 生活周期
        1.3 弓形蟲(chóng)遺傳多樣性
        1.4 弓形蟲(chóng)入侵
        1.5 弓形蟲(chóng)病
    2 宿主免疫
    3 弓形蟲(chóng)疫苗研究
        3.1 滅活蟲(chóng)體、抗原或重組抗原
        3.2 減毒活蟲(chóng)體疫苗
        3.3 核酸疫苗
        3.4 活載體疫苗
    4 SAG1蛋白特性
    5 GRA4蛋白特性
    6 貓皰疹病毒1型
    7 研究目的及意義
材料與方法
    1 材料
        1.1 蟲(chóng)種及質(zhì)粒
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器
        1.4 主各種溶液及培養(yǎng)基
    2 方法
        2.1 弓形蟲(chóng)RH的收集
        2.2 引物設(shè)計(jì)
        2.3 目的基因提取及克隆
        2.4 重組表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定
        2.5 重組蛋白的表達(dá)
        2.6 重組蛋白的純化
        2.7 多克隆抗體的制備
        2.8 多克隆抗體的間接免疫熒光實(shí)驗(yàn)
        2.9 多克隆抗體的Western Blot分析
        2.10 FHV-1轉(zhuǎn)移載體及穿梭質(zhì)粒的構(gòu)建及酶切鑒定
        2.11 在293T細(xì)胞中重組轉(zhuǎn)移載體的表達(dá)
        2.12 表達(dá)產(chǎn)物的Western blotting分析
結(jié)果
    3 目的基因的擴(kuò)增及克隆
        3.1 目的基因的擴(kuò)增
        3.2 原核表達(dá)載體的鑒定
        3.3 重組蛋白的表達(dá)與純化
        3.4 間接免疫熒光
        3.5 多克隆抗體的Western Blot分析
        3.6 FHV-1轉(zhuǎn)移載體及穿梭質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定
        3.7 Western blot分析表達(dá)產(chǎn)物
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介
附錄(在研期間發(fā)表的論文)


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]弓形蟲(chóng)病的研究進(jìn)展[J]. 劉玲利,崔克.  中國(guó)動(dòng)物保健. 2013(10)
[2]剛地弓形蟲(chóng)免疫逃避相關(guān)分子的研究進(jìn)展[J]. 鄭斌,陸紹紅.  中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志. 2012(05)
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[5]BALB/c小鼠感染弓形蟲(chóng)后Th1/Th2免疫漂移的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 李永念,包懷恩.  中國(guó)免疫學(xué)雜志. 2009(03)
[6]剛地弓形蟲(chóng)感染昆明種及Babl/c小鼠的病理特征研究[J]. 李永念,包懷恩.  中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志. 2009(05)
[7]弓形蟲(chóng)Fukaya株在慢性感染小鼠體內(nèi)分布的研究[J]. 劉俊燕,楊秀珍,吳增強(qiáng),楊樹(shù)森.  中國(guó)病原生物學(xué)雜志. 2007(03)
[8]弓形蟲(chóng)致密顆粒蛋白4的原核細(xì)胞表達(dá)與純化[J]. 林綺萍,吳少庭,翁亞彪,雷明軍,潘暉榕,袁仕善,溫見(jiàn)翔,秦莉,黃達(dá)娜,張仁利,高世同.  中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志. 2005(06)
[9]弓形蟲(chóng)SAG1可溶性融合蛋白在大腸埃希菌中的表達(dá)及純化[J]. 朱翔,龔唯,張惠琴,陸惠民,黃偉達(dá).  中國(guó)寄生蟲(chóng)病防治雜志. 2005(05)
[10]扁桃酸治療小鼠急性弓形蟲(chóng)病的效果[J]. 司開(kāi)衛(wèi),李哲,程彥斌,賈榮博.  中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志. 2001(01)

碩士論文
[1]樺褐孔菌多糖對(duì)感染不同毒株弓形蟲(chóng)小白鼠AP-1部分信號(hào)因子的影響研究[D]. 姚琳.延邊大學(xué) 2013



本文編號(hào)：3253468