單增李斯特菌（Listeria monocytogenes, LM）是一種重要的人獸共患病原菌,噬菌體是一類專一寄生的細(xì)菌病毒,具裂解循環(huán)或溶源循環(huán)。PCR及其擴(kuò)增產(chǎn)物的序列測(cè)定顯示38株單增李斯特菌分離株中的16株在tRNAArg位點(diǎn)攜有原噬菌體，利用絲裂霉素C誘導(dǎo)獲得一株溶源性噬菌體，透射電子顯微鏡觀察表明該噬菌體為長尾噬菌體，命名為W001，DNaseI、RNaseA和綠豆核酸酶消化噬菌體基因組的結(jié)果確認(rèn)其核酸為dsDNA。鳥槍法測(cè)定W001基因組序列，run-off法確認(rèn)其基因組末端具有COS位點(diǎn)5’-CGGTGTGGGG-3’, W001基因組全長為42，227個(gè)堿基，由66個(gè)開放閱讀框組成，噬菌體整合核心序列attPP’-AATCCCTCTCAGGACG位于噬菌體整合酶下游。第20個(gè)開放閱讀框編碼全長為281個(gè)氨基酸的噬菌體裂解酶PLYW001，該酶由NH2端的催化結(jié)構(gòu)域(EnzymaticallyActive Domain，EAD和COOH端的結(jié)合結(jié)構(gòu)域（Cell-wall Binding Domain，CBD）組成,利用大腸桿菌表達(dá)并制備裂解酶，Ni柱純化，Bradfo... 

【文章來源】：上海交通大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

噬菌體的裂解循環(huán)和溶源循環(huán)Fig.1-2Lyticcycleandlysogeniccycleofphage

上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文- 8 -圖1-4 裂解酶結(jié)構(gòu)域Fig.1-4 Domains of endolysin注解：1． Endo-β-N-acetylglucosaminidase(內(nèi)-β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶)2． N-acetylmuramidase (N-乙酰胞壁質(zhì)酶)3． Endopeptidase(內(nèi)肽酶)4． N-acetylmuramoyl-L-alanine amidase(N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酸酰氨酶)5． γ-D- glutaminyl-L-lysine endopeptidase (γ-D-谷氨酰胺-L-賴氨酸內(nèi)肽酶)催化結(jié)構(gòu)域EAD的N-乙酰胞壁質(zhì)酶（N-acetylmuramidase）和內(nèi)-β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶（Endo-β-N-acetylglucosaminidase）都作用于宿主菌細(xì)胞壁半糖上的糖苷鍵，內(nèi)肽酶水解肽橋氨基酸之間的肽鍵，N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酸酰氨酶能夠水解連接糖鏈和肽基的酰胺鍵[35-37]，以此來破壞細(xì)菌細(xì)胞壁。EAD決定催化活性，CBD決定底物特異性，根據(jù)裂解裂結(jié)構(gòu)和功能的不同,可將不同裂解酶的催化域和結(jié)合域進(jìn)行重組替換以構(gòu)建具有不同功能的裂解酶。Garcia等人重組了肺炎鏈球菌噬菌體裂解酶Cpl-1，替換了該酶EAD，同時(shí)保持CBD不變，產(chǎn)生一種新酶,新舊兩種酶裂解不同位點(diǎn)的糖苷鍵[38]。1.3.2 影響裂解酶裂解效果幾個(gè)因素?zé)o論是源自革蘭氏陽性菌的噬菌體還是源自革蘭氏陰性菌的噬菌體

上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文果位點(diǎn)的原噬菌體檢測(cè)保存的 38 株 LM 分離株進(jìn)行檢測(cè)，其中 16 株 PCR 檢測(cè)陽小與預(yù)測(cè)一致（圖 2-1），說明在這 16 株菌株的 tRNAArg位純化上述16條PCR產(chǎn)物，以NC16為測(cè)序引物進(jìn)行序列測(cè)定oc 軟件作多重序列分析（圖 2-2），可知 16 條 PCR 產(chǎn)物第 1，為 74 bp 的 tRNAArg基因及其 3’末端的噬菌體整合核TCAGGACG, tRNAArg下游的核苷酸呈現(xiàn)多樣性，分析顯示其可以確認(rèn) PCR 擴(kuò)增陽性的 16 株分離株的 tRNAArg位點(diǎn)確實(shí)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]細(xì)菌耐藥性研究進(jìn)展[J]. 徐海花,牛鐘相,秦愛建,張萬福.  山東農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2010(01)



本文編號(hào)：3253281