為探究雙組分系統(tǒng)arcB基因?qū)κ髠抽T氏菌耐藥性的影響,本研究利用Red同源重組系統(tǒng)構(gòu)建arcB基因缺失株和arcB基因回復(fù)株以及通過無縫克隆和重組技術(shù)構(gòu)建3株arcB基因關(guān)鍵位點點突變株。采用微量稀釋法測定親本株、arcB缺失株、回復(fù)株及點突變株藥物敏感性和體外生長速率,初步分析雙組分系統(tǒng)arcB基因?qū)κ髠抽T氏菌耐藥性的影響。結(jié)果顯示,經(jīng)PCR測序鑒定結(jié)果表明構(gòu)建了鼠傷寒沙門氏菌CVCC541ΔarcB缺失株及其回復(fù)株、arcB基因點突變株(arcB^His-292-Ala、arcB^Asp-576-Ala、arcB^His-717-Ala)。生長曲線測定結(jié)果顯示:缺失株、點突變株和親本株相比生長速率降低,回復(fù)株生長速率回復(fù),與親本株生長曲線一致;MIC測定結(jié)果顯示:與親本株相比,arcB基因缺失株對β-內(nèi)酰胺類、大環(huán)內(nèi)酯類、四環(huán)素類、氯霉素類抗生素的敏感性無變化,但對氨基糖苷類的鏈霉素、阿米卡星、慶大霉素的耐藥性分別增加16、8、4倍;基于該結(jié)果測定的各菌株對氨基糖苷類抗生素的MIC結(jié)果顯示:與親本株相比,arcB基... 

【文章來源】：中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 2020,42(09)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

各菌株的生長曲線

將含arc B基因的完整ORF及上游423 bp、下游543 bp序列的回復(fù)株采用2對引物分別經(jīng)PCR鑒定。結(jié)果顯示，利用引物RV-M/M13-47擴增出3 033 bp的兩端含有酶切位點的arc B基因片段；利用引物arc B-F/R擴增的2865 bp的arc B基因片段和591 bp的arc B基因缺失片段，與預(yù)期結(jié)果一致（圖2），同時利用引物RV-M/M13-47鑒定質(zhì)粒p STV28電轉(zhuǎn)入CVCC541Δarc B的重組菌株，擴增出150 bp的質(zhì)粒片段（圖略），測序結(jié)果顯示擴增序列正確。表明正確構(gòu)建回復(fù)株CVCC541Δarc B/parc B及質(zhì)粒對照菌株p STV28/CVCC541Δarc B。圖2 CVCC541ΔarcB/parcB的PCR鑒定結(jié)果

CVCC541ΔarcB/parcB的PCR鑒定結(jié)果

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Red重組系統(tǒng)用于大腸桿菌基因修飾研究進展[J]. 張雪,溫廷益.  中國生物工程雜志. 2008(12)



本文編號：3252478