為了獲得在體外表達(dá)的豬圓環(huán)病毒2型（Porcine circovirus 2,PCV2）Cap蛋白,研究其免疫原性,試驗(yàn)根據(jù)GenBank公布的國(guó)內(nèi)PCV2-Cap蛋白基因序列特點(diǎn),結(jié)合畢赤酵母密碼子偏好對(duì)Cap基因進(jìn)行優(yōu)化,合成目的基因后,構(gòu)建分泌型表達(dá)載體pPIC9K-Cap,轉(zhuǎn)化畢赤酵母GS115后,經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組Cap蛋白。重組蛋白以50μg/只的劑量連續(xù)3次免疫豚鼠后檢測(cè)抗體水平。結(jié)果表明:含有PCV2-Cap基因的質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)化到酵母菌基因組中,重組酵母菌株在30℃,經(jīng)1%甲醇誘導(dǎo)表達(dá)96 h后,培養(yǎng)液中能夠檢測(cè)到33 ku的重組蛋白,重組蛋白表達(dá)量為155μg/mL,占培養(yǎng)上清液總蛋白的9.362%,Western-blot試驗(yàn)結(jié)果顯示重組蛋白具有良好的抗原活性。重組蛋白以50μg/只的劑量連續(xù)3次免疫豚鼠后,能夠刺激豚鼠產(chǎn)生特異性抗體且與接種0.3頭份/只劑量的市售PCV2滅活疫苗產(chǎn)生的抗體水平無(wú)顯著差異（P>0.05）。說(shuō)明成功利用畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)分泌表達(dá)了PCV2-Cap蛋白,表達(dá)的重組蛋白具有良好的抗原活性。 

【文章來(lái)源】：黑龍江畜牧獸醫(yī). 2020,(10)北大核心

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【部分圖文】：

PCV2-Cap基因PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果

菌落PCR鑒定結(jié)果表明,空載體菌株擴(kuò)增出492 bp的載體片段,克隆菌株擴(kuò)增出1 194 bp目的基因片段,均與預(yù)期相符,見(jiàn)圖3。測(cè)序結(jié)果表明與設(shè)計(jì)合成的基因序列完全一致。圖3 重組酵母菌株的PCR鑒定結(jié)果

重組酵母菌株的PCR鑒定結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]華東地區(qū)豬圓環(huán)病毒2型基因型鑒別及ORF2遺傳變異分析[J]. 王苗苗,王婷婷,朱建國(guó).  畜牧與獸醫(yī). 2018(07)
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博士論文
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碩士論文
[1]豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白基因在畢赤酵母中的表達(dá)與復(fù)合水佐劑的研制[D]. 侯成才.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014



本文編號(hào)：3246143