為了獲得在體外表達的豬圓環(huán)病毒2型（Porcine circovirus 2,PCV2）Cap蛋白,研究其免疫原性,試驗根據GenBank公布的國內PCV2-Cap蛋白基因序列特點,結合畢赤酵母密碼子偏好對Cap基因進行優(yōu)化,合成目的基因后,構建分泌型表達載體pPIC9K-Cap,轉化畢赤酵母GS115后,經誘導表達獲得重組Cap蛋白。重組蛋白以50μg/只的劑量連續(xù)3次免疫豚鼠后檢測抗體水平。結果表明:含有PCV2-Cap基因的質粒成功轉化到酵母菌基因組中,重組酵母菌株在30℃,經1%甲醇誘導表達96 h后,培養(yǎng)液中能夠檢測到33 ku的重組蛋白,重組蛋白表達量為155μg/mL,占培養(yǎng)上清液總蛋白的9.362%,Western-blot試驗結果顯示重組蛋白具有良好的抗原活性。重組蛋白以50μg/只的劑量連續(xù)3次免疫豚鼠后,能夠刺激豚鼠產生特異性抗體且與接種0.3頭份/只劑量的市售PCV2滅活疫苗產生的抗體水平無顯著差異（P>0.05）。說明成功利用畢赤酵母表達系統分泌表達了PCV2-Cap蛋白,表達的重組蛋白具有良好的抗原活性。 

【文章來源】：黑龍江畜牧獸醫(yī). 2020,(10)北大核心

【文章頁數】：5 頁

【部分圖文】：

PCV2-Cap基因PCR產物電泳結果

菌落PCR鑒定結果表明,空載體菌株擴增出492 bp的載體片段,克隆菌株擴增出1 194 bp目的基因片段,均與預期相符,見圖3。測序結果表明與設計合成的基因序列完全一致。圖3 重組酵母菌株的PCR鑒定結果

重組酵母菌株的PCR鑒定結果

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白基因在畢赤酵母中的表達與復合水佐劑的研制[D]. 侯成才.南京農業(yè)大學 2014



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