發(fā)布時(shí)間：2021-06-22 03:58

　　星狀病毒（Astrovirus）是一類宿主眾多的RNA病毒,常見癥狀為腹瀉,除此之外還有神經(jīng)癥狀、呼吸癥狀、肝炎、腎炎、腸疊套等。多項(xiàng)研究表明星狀病毒易發(fā)生跨物種的傳播和基因重組,該病毒已成為一種潛在的人畜共患病原。豬星狀病毒（Porcine astrovirus,PAstV）共分為5個(gè)基因型,雖然各個(gè)地區(qū)流行的基因型不盡相同,但都具有較高的感染率,并且存在多種基因型共同感染的現(xiàn)象。然而目前關(guān)于豬星狀病毒檢測技術(shù)及預(yù)防手段的研究仍較少。本研究對(duì)河北地區(qū)一株豬星狀病毒進(jìn)行了遺傳進(jìn)化分析,并建立了檢測豬星狀病毒4型的SYBRGreenⅠ熒光定量PCR方法和間接ELISA檢測方法,對(duì)河北地區(qū)豬星狀病毒的基因結(jié)構(gòu)和流行情況進(jìn)行了初步的調(diào)查。另一方面本研究初步構(gòu)建了可用作核酸疫苗的真核表達(dá)載體并進(jìn)行了免疫原性研究,為以后的豬星狀病毒疫苗研究工作奠定了基礎(chǔ)。本研究從河北地區(qū)的豬腹瀉病料樣品中檢測到一株豬星狀病毒,并命名為PAstV4 CH-HB-SJZ。隨后設(shè)計(jì)引物進(jìn)行基因序列的擴(kuò)增并進(jìn)行了進(jìn)化樹分析及同源性分析。試驗(yàn)中成功擴(kuò)增出6733 nt的病毒序列,包括全部病毒CDS片段和5’UTR,以及大... 

【文章來源】：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)河北省

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２星狀病毒的基因結(jié)構(gòu)ｌ２９］??Ｆｉｇ．２?Ｔｈｅ?ｇｅｎｏｍｅ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?Ａｓｔｒｏｖｉｒｕｓ??

?河北農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位（畢業(yè)）論文???３結(jié)果與分析??３．１?ＰＡｓｔＶ臨床檢測結(jié)果??通過對(duì)采集自河北省的２０１９年仔豬腹瀉糞便進(jìn)行核酸的提取反轉(zhuǎn)錄以及ＰＣＲ，我們利用檢??測引物ＰＡ－Ｆ／Ｒ檢測到１份陽性樣品，陽性樣品進(jìn)行回收并測序，測序結(jié)果顯示樣品確定為豬星??狀病毒。??３．２?ＰＡｓｔＶ?ＣＨ－ＨＢ－ＳＪＺ株序列的擴(kuò)增測序及分析??３．２．１基因序列的擴(kuò)增??利用軟件Ｐｒｉｍｅｒ?Ｐｒｅｍｉｅｒ設(shè)計(jì)７對(duì)引物對(duì)ＰＡｓｔＶ４型陽性樣品進(jìn)行基因序列的擴(kuò)增，成功擴(kuò)??增得到對(duì)應(yīng)的目的片段，各目的片段大小分別為１５４４ｂｐ，１１９２ｂｐ，１２２７ｂｐ，１１７７ｂｐ，１４９５ｂｐ，??１３８４ｂｐ和１２７２ｂｐ?（圖３）。目的片段回收連接轉(zhuǎn)化及測序后，測序序列經(jīng)ＮＣＢＩ網(wǎng)站基因比對(duì)，??均鑒定為ＰＡｓｔＶ無誤。??ｂｐ?１?２３?Ｍ?４?５６?７??２０００??ｌｏｏｏ?．．．．．．．．．丨．丨??７５０?碥心?般，??５００?ｔ?＇１：｜｜?＇?’??２５０?｜?［＇??１００?Ｉ賴藝＿議鍵麵龜＿￡＿顏�。哒饝佘半u壽議??圖３?ＰＡｓｔＶ基因序列的擴(kuò)增??Ｍ．ＤＬ２０００?ＤＮＡ分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；１－７．?ＨＢ－ＳＪＺ片段??Ｆｉｇ．３?Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｆｏｒ?ＰＡｓｔＶ?ｓｅｑｕｅｎｃｅ??Ｍ．?ＤＬ２０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ，?１－７．?Ｔｈｅ?ｓｅｑｕｅｎｃｅ?ｏｆ?ＨＢ－ＳＪＺ?ｓｔｒａｉｎ??３．２．２?ＰＡｓｔＶ?ＣＨ－ＨＢ－ＳＪＺ株的基因結(jié)構(gòu)特點(diǎn)分析??用ＤＮＡｓｔａｒ中的ＳｅｑＭａｎ軟件對(duì)７個(gè)基因片段的測序結(jié)果進(jìn)行拼接，得到了長為６７３３?ｎｔ的??２４??

?豬星狀病毒４型檢測方法的建立及其核酸疫苗的初步構(gòu)建???ｂｐ?Ｍ?１?２??一??誠｜麵Ｃ??２０００??ｌｏｏｏ??７５０?纖??５００??２５０??］〇〇??圖６?ＰＡｓｔＶ４?ＯＲＦｌｂ基因ＰＣＲ擴(kuò)增??Ｍ．ＤＬ２０００?ＤＮＡ分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；ｌ．ＰＣＲ產(chǎn)物；２．陰性對(duì)照??Ｆｉｇ．６?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＰＡｓｔＶ４?ＯＲＦｌｂ?ｇｅｎｅ??Ｍ．?ＤＬ２０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ，?１．?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔ，?２．?Ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ??３．３．２原核表達(dá)重組載體ｐＥＴ３２ａ－ｎｓｐ的構(gòu)建及鑒定??３．３．２．１重組載體ｐＭＤ１９－Ｔ－ｎｓｐ的雙酶切鑒定??ｐＭＤ１９－Ｔ－ｎｓｐ質(zhì)粒用￡ｃｏＲ丨和辦〇１雙酶切，經(jīng)電泳后可明顯看見兩條明顯的條帶，約４９０??ｂｐ大小的目的片段和２６９２?ｂｐ大小的線性載體片段（圖７）。??ｂｐ?Ｍ?１??＇＇Ｊｉｉｕｉｕｉｗｗｗ??２０００??＿?ｆ，．麵??５００?〇■??２５０??１００?■■■??圖７?ｐＭＤ１９－Ｔ－ｎｓｐ雙酶切鑒定??Ｍ．ＤＬ２０００?ＤＮＡ分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；１．酶切產(chǎn)物??Ｆｉｇ．７?Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｉ?ｏｆ?ｐＭＤ１９－Ｔ－ｎｓｐ?ｂｙ?ｅｎｚｙｍｅ?ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ??Ｍ．?ＤＬ２０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ，?１．?Ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?ｅｎｚｙｍｅ?ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ??２７??

【參考文獻(xiàn)】：
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博士論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3242069