星狀病毒（Astrovirus）是一類宿主眾多的RNA病毒,常見癥狀為腹瀉,除此之外還有神經(jīng)癥狀、呼吸癥狀、肝炎、腎炎、腸疊套等。多項研究表明星狀病毒易發(fā)生跨物種的傳播和基因重組,該病毒已成為一種潛在的人畜共患病原。豬星狀病毒（Porcine astrovirus,PAstV）共分為5個基因型,雖然各個地區(qū)流行的基因型不盡相同,但都具有較高的感染率,并且存在多種基因型共同感染的現(xiàn)象。然而目前關于豬星狀病毒檢測技術及預防手段的研究仍較少。本研究對河北地區(qū)一株豬星狀病毒進行了遺傳進化分析,并建立了檢測豬星狀病毒4型的SYBRGreenⅠ熒光定量PCR方法和間接ELISA檢測方法,對河北地區(qū)豬星狀病毒的基因結構和流行情況進行了初步的調查。另一方面本研究初步構建了可用作核酸疫苗的真核表達載體并進行了免疫原性研究,為以后的豬星狀病毒疫苗研究工作奠定了基礎。本研究從河北地區(qū)的豬腹瀉病料樣品中檢測到一株豬星狀病毒,并命名為PAstV4 CH-HB-SJZ。隨后設計引物進行基因序列的擴增并進行了進化樹分析及同源性分析。試驗中成功擴增出6733 nt的病毒序列,包括全部病毒CDS片段和5’UTR,以及大... 

【文章來源】：河北農業(yè)大學河北省

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２星狀病毒的基因結構ｌ２９］??Ｆｉｇ．２?Ｔｈｅ?ｇｅｎｏｍｅ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?Ａｓｔｒｏｖｉｒｕｓ??

?河北農業(yè)大學碩士學位（畢業(yè)）論文???３結果與分析??３．１?ＰＡｓｔＶ臨床檢測結果??通過對采集自河北省的２０１９年仔豬腹瀉糞便進行核酸的提取反轉錄以及ＰＣＲ，我們利用檢??測引物ＰＡ－Ｆ／Ｒ檢測到１份陽性樣品，陽性樣品進行回收并測序，測序結果顯示樣品確定為豬星??狀病毒。??３．２?ＰＡｓｔＶ?ＣＨ－ＨＢ－ＳＪＺ株序列的擴增測序及分析??３．２．１基因序列的擴增??利用軟件Ｐｒｉｍｅｒ?Ｐｒｅｍｉｅｒ設計７對引物對ＰＡｓｔＶ４型陽性樣品進行基因序列的擴增，成功擴??增得到對應的目的片段，各目的片段大小分別為１５４４ｂｐ，１１９２ｂｐ，１２２７ｂｐ，１１７７ｂｐ，１４９５ｂｐ，??１３８４ｂｐ和１２７２ｂｐ?（圖３）。目的片段回收連接轉化及測序后，測序序列經(jīng)ＮＣＢＩ網(wǎng)站基因比對，??均鑒定為ＰＡｓｔＶ無誤。??ｂｐ?１?２３?Ｍ?４?５６?７??２０００??ｌｏｏｏ?．．．．．．．．．丨．丨??７５０?碥心?般，??５００?ｔ?＇１：｜｜?＇?’??２５０?｜?［＇??１００?Ｉ賴藝＿議鍵麵龜＿￡＿顏�。哒饝佘半u壽議??圖３?ＰＡｓｔＶ基因序列的擴增??Ｍ．ＤＬ２０００?ＤＮＡ分子質量標準；１－７．?ＨＢ－ＳＪＺ片段??Ｆｉｇ．３?Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｆｏｒ?ＰＡｓｔＶ?ｓｅｑｕｅｎｃｅ??Ｍ．?ＤＬ２０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ，?１－７．?Ｔｈｅ?ｓｅｑｕｅｎｃｅ?ｏｆ?ＨＢ－ＳＪＺ?ｓｔｒａｉｎ??３．２．２?ＰＡｓｔＶ?ＣＨ－ＨＢ－ＳＪＺ株的基因結構特點分析??用ＤＮＡｓｔａｒ中的ＳｅｑＭａｎ軟件對７個基因片段的測序結果進行拼接，得到了長為６７３３?ｎｔ的??２４??

?豬星狀病毒４型檢測方法的建立及其核酸疫苗的初步構建???ｂｐ?Ｍ?１?２??一??誠｜麵Ｃ??２０００??ｌｏｏｏ??７５０?纖??５００??２５０??］〇〇??圖６?ＰＡｓｔＶ４?ＯＲＦｌｂ基因ＰＣＲ擴增??Ｍ．ＤＬ２０００?ＤＮＡ分子質量標準；ｌ．ＰＣＲ產物；２．陰性對照??Ｆｉｇ．６?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＰＡｓｔＶ４?ＯＲＦｌｂ?ｇｅｎｅ??Ｍ．?ＤＬ２０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ，?１．?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔ，?２．?Ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ??３．３．２原核表達重組載體ｐＥＴ３２ａ－ｎｓｐ的構建及鑒定??３．３．２．１重組載體ｐＭＤ１９－Ｔ－ｎｓｐ的雙酶切鑒定??ｐＭＤ１９－Ｔ－ｎｓｐ質粒用￡ｃｏＲ丨和辦〇１雙酶切，經(jīng)電泳后可明顯看見兩條明顯的條帶，約４９０??ｂｐ大小的目的片段和２６９２?ｂｐ大小的線性載體片段（圖７）。??ｂｐ?Ｍ?１??＇＇Ｊｉｉｕｉｕｉｗｗｗ??２０００??＿?ｆ，．麵??５００?〇■??２５０??１００?■■■??圖７?ｐＭＤ１９－Ｔ－ｎｓｐ雙酶切鑒定??Ｍ．ＤＬ２０００?ＤＮＡ分子質量標準；１．酶切產物??Ｆｉｇ．７?Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｉ?ｏｆ?ｐＭＤ１９－Ｔ－ｎｓｐ?ｂｙ?ｅｎｚｙｍｅ?ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ??Ｍ．?ＤＬ２０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ，?１．?Ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?ｅｎｚｙｍｅ?ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ??２７??

【參考文獻】：
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本文編號：3242069