試驗旨在構(gòu)建山羊骨骼肌特異性基因α-actin啟動子驅(qū)動的Fat-1表達(dá)載體。將Fat-1基因克隆入pEGFP-N1載體,構(gòu)建成為pEGFPN1-Fat-1載體;插入CMV增強子和骨骼肌特異性基因α-actin啟動子,構(gòu)建成為α-actin promoter-pEGFPN1-Fat-1表達(dá)載體;最后通過流式細(xì)胞儀檢測轉(zhuǎn)Fat-1基因?qū)ι窖蚨衫w維細(xì)胞周期和凋亡的影響。雙酶切和測序證實,已成功構(gòu)建了肌肉組織特異性表達(dá)載體α-actin promoter-pEGFPN1-Fat-1;與對照組相比,轉(zhuǎn)Fat-1基因促進羊耳成纖維細(xì)胞增殖,抑制凋亡。試驗結(jié)果為動物轉(zhuǎn)基因工程的研究和應(yīng)用提供了參考依據(jù)。 

【文章來源】：畜牧與獸醫(yī). 2020,52(12)北大核心

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

骨骼肌特異性基因α-actin啟動子驅(qū)動的Fat-1基因表達(dá)載體的構(gòu)建示意圖

將切膠回收后的Fat-1和線性化pEGFP-N1的cDNA末端補平,進行平末端連接。pEGFPN1-Fat-1中Fat-1基因序列與EGFP連接處正確(圖4)。圖3 BamHⅠ酶切pEGFP-N1質(zhì)粒

BamHⅠ酶切pEGFP-N1質(zhì)粒


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