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共表達不同外源基因的重組弱毒Ⅰ型馬立克氏病毒的構建和生物學特性比較

發(fā)布時間:2021-06-16 09:35
  馬立克氏病毒(Marek′s disease virus, MDV)是α皰疹病毒的成員,基因組為180kb左右的雙股DNA,可引起雞的淋巴細胞瘤。GX0101株MDV是國內外從雞體內分離到的第一株整合有網(wǎng)狀內皮組織增生癥病毒(Reticuloendotheliosis virus, REV)長末端重復序列(Long terminal repeat, LTR)的重組野毒株。本實驗室前期研究中已經(jīng)構建了GX0101的細菌人工染色體(Bacterial artificial chromosome, BAC)克隆,并構建了敲除腫瘤基因meq的突變株GX0101meq病毒。該基因缺失性MDV不但喪失對SPF雞的致病性,而且不再引起腫瘤以及胸腺和法氏囊萎縮。本文利用敲除meq基因的GX0101株MDV作為載體表達AIV-H9N2和NDV主要保護抗原基因,構建了2株敲除meq致腫瘤基因且同時表達2種不同外源基因的重組MDV。通過體內和體外連續(xù)傳代分析這些重組MDV在細胞水平和動物體內的復制能力、探討插入片段在重組MDV基因組中的穩(wěn)定性、通過免疫SPF雞這些重組MDV在體內誘導雞的免疫應答的能力,從而... 

【文章來源】:山東農(nóng)業(yè)大學山東省

【文章頁數(shù)】:138 頁

【學位級別】:博士

【部分圖文】:

共表達不同外源基因的重組弱毒Ⅰ型馬立克氏病毒的構建和生物學特性比較


單鏈DNA退火后的圖譜

物理圖譜,血清型,皰疹病毒,亞科


特別是淋巴趨向性,MDV 在分類上應屬于γ亞科皰疹病毒,但其基因組及分子結構與α亞科皰疹病毒更加相似(Buckmaster et al.,1988)。圖 1- 2 單鏈 DNA 退火后的圖譜Fig. 2 The structure of single MDV DNA現(xiàn)已分別建立了 MDV 血清 1 型、2 型及 3 型(HVT)的限制性酶切圖譜(Fukuchiet al., 1984; Igarashi et al., 1987; Ono, Katsuragi-Iwanaga et al., 1992),Ono 等繪制了MDV 3 種血清型的限制性內切酶 BamHI 的物理圖譜。Ⅰ型 MDV 和Ⅲ型 MDV 僅有5%的同源性,Ⅱ型 MDV 與Ⅰ型、Ⅲ型的同源性也小于 10%。

結構圖,全基因組,結構圖,基因組


Lee(Lee et al., 2000)等繪制出了 GA 株的全基因組結構圖譜。為今后MDV 全基因組分析提供可參考依據(jù)。整個 MDV GA 株中 UL 區(qū)為 113508-bp,RL 區(qū)長約為 12584-bp,RS 區(qū)和 US 區(qū)分別約為 12121-bp 和 11160-bp。由于 Md5 基因組中的 TRL 和 IRL 區(qū)域直接重復序列拷貝數(shù)增加以及 IRS 和 TRS 區(qū)域長度增加,使得I 型 MDV 結構差異很小,GA 的基因組比 Md5 稍微小一點。

【參考文獻】:
期刊論文
[1]馬立克氏病病毒meq基因敲除株感染性克隆的免疫效果評價[J]. 李延鵬,康孟佼,蘇帥,丁家波,崔治中,朱鴻飛.  微生物學報. 2010(07)
[2]敲除meq的雞馬立克氏病毒強毒株對超強毒的免疫保護作用[J]. 蘇帥,李延鵬,孫愛軍,趙鵬,丁家波,朱鴻飛,崔治中.  微生物學報. 2010(03)
[3]A BAC clone of MDV strain GX0101 with REV-LTR integration retained its pathogenicity[J]. LAWRENCE Petherbridge,NAIR Venugopal K.  Chinese Science Bulletin. 2009(15)
[4]雞馬立克氏病病毒814株細菌人工染色體的構建[J]. 崔紅玉,王云峰,石星明,童光志,蘭德松,何來,仇華吉,劉長軍,王玫.  生物工程學報. 2008(04)
[5]整合進禽反轉錄病毒長末端重復序列的馬立克氏病病毒的分離鑒定[J]. 周祥,韋平,滕麗瓊.  畜牧與獸醫(yī). 2007(08)
[6]雞胚中新城疫強毒的分離、鑒定與生物學特性研究[J]. 孫淑紅,崔治中.  畜牧獸醫(yī)學報. 2007(07)
[7]The enhancement effect of pp38 gene product on the activity of its upstream bi-directional promoter in Marek’s disease virus[J]. REDDY Sanjay.  Science in China(Series C:Life Sciences). 2006(01)
[8]Ⅰ型馬立克氏病病毒pp38和pp24基因的真核共表達[J]. 姜世金,丁家波,孟珊珊,崔治中,楊漢春.  中國病毒學. 2005(04)
[9]馬立克氏病病毒pp38基因和1.8kb轉錄子之間雙向啟動子的特性研究[J]. 丁家波,崔治中,姜世金,孫愛軍,孫淑紅.  微生物學報. 2005(03)
[10]J亞群白血病病毒NX0101株感染性克隆化病毒的構建及其致病性[J]. 張紀元,崔治中,丁家波,姜世金.  微生物學報. 2005(03)

博士論文
[1]我國近年來馬立克氏病病毒野毒株分子流行病學和生物學特性的研究[D]. 張志.山東農(nóng)業(yè)大學 2004



本文編號:3232828

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